Siirry sisältöön
SVI
Kudos
Munuaiset

Asiakirjat

SVI

Cell line · Tuotenumero 400495

SVI-solulinja on kloonattu H-2kb-tsA58-transgeenisistä hiiristä eristettyjen glomerulien kasvustosta. Hiirillä on lämpötilaherkkä...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja

Räätälöinti / Suositukset

Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
SVI-solulinja on kloonattu H-2kb-tsA58-transgeenisistä hiiristä eristetyistä glomerulista. Hiiret kantavat SV40 large T -antigeenin lämpötilaherkkää muunnosta IFN-g-indusoituvan H-2kb-promoottorin ohjaamana. Solut lisääntyvät 33 celsiusasteen lämpötilassa ja erilaistuvat 37 celsiusasteen lämpötilassa. Tällä hetkellä soluja on viljelty onnistuneesti yli 40 läpiviennin ajan ilman fenotyyppisiä muutoksia. SVI on morfologialtaan ja useiden merkkiaineiden ilmentymiseltään hyvin samankaltainen kuin E11. Esimerkiksi podosiinia ja WT1:tä ilmentyy vähemmän kuin E11:ssä. Erilaistuminen: Aloitetaan erilaistumisprosessi asettamalla ei-konfluentti pullo(t) inkubaattoriin 38 celsiusasteen lämpötilassa / 5 % CO2:ssa vähintään 14 päiväksi erilaistumisen loppuun saattamiseksi. Interferoni-gamman (INF-gamma) lisääminen ei ole tarpeen.
Kudos
Munuaiset

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Sukupuoli
Määrittelemätön
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Solutyyppi
Podosyytti

04Tunnisteet

Lähdeviite
SVI (Cytionin luettelonumero 400495)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
WT1, Lmx1b, nefriini, NEPHI, FAT, P-kadheriini, CD2AP, ZO-I, podokalyksiini, podoplaniini, synpo, podosiini, TRPC6 ja GAPDH.

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

33 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
Inokuloidaan T75-soluviljelypulloihin 1x 104 solua/cm2 (noin 60 000 solua/ml, 12 ml väliainetta yhdessä T75-pullossa) proliferaatioprosessia varten. Soluja pidetään 33 celsiusasteessa / 5 % CO2:ssa, kunnes pullo on noin 75 % konfluentti.
Nesteen uusiminen
3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Rotua / alalajia
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort (kuolematon)
Luovuttajan ikä
Aikuiset