Zum Inhalt springen
SVI
Gewebe
Niere

Dokumente

SVI

Cell line · Artikelnummer 400495

Die SVI-Zelllinie wurde aus dem Auswuchs von Glomeruli kloniert, die aus transgenen H-2kb-tsA58-Mäusen isoliert wurden. Die Mäuse tragen ein temperaturempfindliches...

€800.00zzgl. MwSt. und Versandkosten

Anpassung / Empfehlungen

Auf Lager
Charge
Empfohlen (frischeste Charge)
1

01Allgemeine Informationen

Beschreibung
Die SVI-Zelllinie wurde aus dem Auswuchs von Glomeruli geklont, die aus H-2kb-tsA58 transgenen Mäusen isoliert wurden. Die Mäuse tragen eine temperaturempfindliche Variante des SV40 large T-Antigens unter Kontrolle des IFN-g-induzierbaren H-2kb-Promotors. Die Zellen vermehren sich bei 33 Grad Celsius, und sie differenzieren sich bei 37 Grad Celsius. Derzeit werden die Zellen erfolgreich über mehr als 40 Passagen kultiviert, ohne dass phänotypische Veränderungen festgestellt werden. SVI sind E11 in Bezug auf die Morphologie und die Expression verschiedener Marker sehr ähnlich. So werden beispielsweise Podocin und WT1 im Vergleich zu E11 in geringerem Maße exprimiert. Differenzierung: Beginnen Sie den Differenzierungsprozess, indem Sie die nicht-konfluenten Kolben für mindestens 14 Tage in einen Inkubator bei 38 Grad Celsius / 5% CO2 stellen, um die Differenzierung abzuschließen. Die Zugabe von Interferon-gamma (INF-gamma) ist nicht erforderlich.
Gewebe
Niere

02Klassifizierung

Organismus
Maus
Sex
Nicht näher bezeichnet
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Zelltyp
Podozyten

04Bezeichner

Quellenangabe
SVI (Cytion-Katalognummer 400495)
NCBI-Steuer-ID
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
WT1, Lmx1b, Nephrin, NEPHI, FAT, P-Cadherin, CD2AP, ZO-I, Podocalyxin, Podoplanin, Synpo, Podocin, TRPC6 und GAPDH.

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

33°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
Impfen Sie T75-Zellkulturflaschen mit 1x 104 Zellen/cm2 (etwa 60.000 Zellen/ml, 12 ml Medium in einer T75) für den Proliferationsprozess. Halten Sie die Zellen bei 33 Grad Celsius / 5 % CO2, bis die Flasche zu etwa 75 % konfluent ist.
Flüssigkeitswechsel
3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Alter des Spenders
Erwachsener