Gå til innholdet
SVI
Vev
Nyre

Dokumenter

SVI

Cell line · Produktnummer 400495

SVI-cellelinjen er klonet fra utvekster av glomeruli som ble isolert fra transgene H-2kb-tsA58-mus. Musene bærer et temperaturfølsomt...

€800.00ekskl. mva. og frakt

Tilpasning / Anbefalinger

På lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
1

01Generell informasjon

Beskrivelse
SVI-cellelinjen er klonet fra utveksten av glomeruli som ble isolert fra H-2kb-tsA58-transgene mus. Musene bærer en temperaturfølsom variant av SV40 large T-antigenet under kontroll av den IFN-g-inducerbare H-2kb-promotoren. Cellene formerer seg ved 33 grader Celsius, og de differensierer ved 37 grader Celsius. Cellene har blitt dyrket i mer enn 40 passasjer uten at det har skjedd fenotypiske endringer. SVI er svært like E11 når det gjelder morfologi og uttrykk av flere markører. For eksempel uttrykkes podocin og WT1 i mindre grad sammenlignet med E11. Differensiering: Start differensieringsprosessen ved å plassere de ikke-flytende kolbene i en inkubator ved 38 grader Celsius / 5 % CO2 i minst 14 dager for å fullføre differensieringen. Tilsetning av interferon-gamma (INF-gamma) er ikke nødvendig.
Vev
Nyre

02Klassifisering

Organisme
Mus
Sex
Uspesifisert
Vekstegenskaper
Tilhenger
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Celletype
Podocytt

04Identifikatorer

Kildehenvisning
SVI (Cytion-katalognummer 400495)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Uttrykk og mottakelighet

Proteinekspresjon
WT1, Lmx1b, nefrin, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 og GAPDH.

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
RPMI 1640, m: 2,0 mM stabil glutamin, m: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikkelnummer 820700a)
Inkubasjonsatmosfære

33 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Såtetthet
Inokulere T75-cellekulturflasker med 1x 104 celler/cm2 (ca. 60 000 celler/ml, 12 ml medium i en T75) for proliferasjonsprosessen. Hold cellene ved 33 grader Celsius / 5 % CO2, til flasken er ca. 75 % konfluent.
Væskefornyelse
3 ganger per uke
Tining og dyrking

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Rase / underart
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Donorens alder
Voksen