İçeriğe atla
SVI
Doku
Böbrek

Belgeler

SVI

Cell line · Ürün numarası 400495

SVI hücre hattı, H-2kb-tsA58 transgenik farelerden izole edilen glomerüllerin uzantılarından klonlanmıştır. Bu fareler, sıcaklığa duyarlı bir...

€800.00vergi ve kargo hariç

Kişiselleştirme / Öneriler

Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
1

01Genel bilgiler

Açıklama
SVI hücre hattı, H-2kb-tsA58 transgenik farelerden izole edilen glomerüllerin büyümesinden klonlanmıştır. Bu fareler, IFN-g ile indüklenebilir H-2kb promotörünün kontrolü altında SV40 büyük T antijeninin sıcaklığa duyarlı bir varyantını taşımaktadır. Hücreler 33 santigrat derecede çoğalmakta ve 37 santigrat derecede farklılaşmaktadır. Şu anda hücreler, fenotipik değişikliklere rastlanmadan 40'tan fazla pasaj boyunca başarıyla kültüre edilmiştir. SVI, morfoloji ve çeşitli belirteçlerin ifadesi açısından E11'e çok benzemektedir. Örneğin, podocin ve WT1, E11'e kıyasla daha az oranda ifade edilmektedir. Farklılaşma: Farklılaşmayı tamamlamak için akıcı olmayan şişeleri en az 14 gün boyunca 38 santigrat derece / %5 CO2'de bir inkübatöre yerleştirerek farklılaşma sürecini başlatın. İnterferon-gama (INF-gama) ilavesi gerekli değildir.
Doku
Böbrek

02Sınıflandırma

Canlı
Fare
Cinsiyet
Belirtilmemiş
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Hücre türü
Podosit

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
SVI (Cytion katalog numarası 400495)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
WT1, Lmx1b, nephrin, NEPHI, FAT, P-cadherin, CD2AP, ZO-I, podocalyxin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 ve GAPDH.

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
RPMI 1640, w: 2.0 mM stabil Glutamin, w: 2.0 g/L NaHCO3 (Cytion makale numarası 820700a)
Kuluçka ortamı

33°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Ekim yoğunluğu
Çoğaltma işlemi için T75 hücre kültürü şişelerine 1x 104 hücre/cm2 (yaklaşık 60.000 hücre/ml, bir T75'te 12 ml ortam) ekleyin. Şişe yaklaşık %75 dolana kadar hücreleri 33 derece Celsius / %5 CO2'de tutun.
Sıvı değişimi
haftada 3 kez
Çözme ve kültürleme

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Tür / alt tür
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Bağışçının yaşı
Yetişkin