الانتقال إلى المحتوى
SVI
الأنسجة
الكلى

المستندات

SVI

Cell line · رقم المنتج 400495

تم استنساخ خط الخلايا SVI من نمو الكبيبات التي تم عزلها من الفئران المعدلة وراثيًا H-2kb-tsA58. وتحمل هذه الفئران جينًا حساسًا للحرارة...

€800.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن

التخصيص / التوصيات

متوفر
لوت
موصى بها (أحدث دفعة)
1

01معلومات عامة

الوصف
تم استنساخ خط الخلايا SVI من نواتج الكبيبات التي تم عزلها من الفئران المعدلة وراثياً H-2kb-tsA58. تحمل هذه الفئران متغيراً حساساً لدرجة الحرارة من مستضد SV40 T الكبير تحت سيطرة محفز H-2kb المحفز H-2kb المحفز لـ IFN-g. تتكاثر الخلايا عند درجة حرارة 33 درجة مئوية، وتتمايز عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. في الوقت الحاضر، تمت زراعة الخلايا بنجاح لأكثر من 40 ممرًا دون ملاحظة تغيرات في النمط الظاهري. تتشابه خلايا SVI إلى حد كبير مع خلايا E11 من حيث الشكل والتعبير عن عدة علامات. على سبيل المثال، يتم التعبير عن البودوسين و WT1 بدرجة أقل مقارنةً ب E11. التمايز: بدء عملية التمايز عن طريق وضع القارورة (القوارير) غير المملوءة في حاضنة عند درجة حرارة 38 درجة مئوية / 5٪ CO2 لمدة 14 يومًا على الأقل لإكمال التمايز. لا يلزم إضافة الإنترفيرون-جاما (INF-gamma).
الأنسجة
الكلى

02التصنيف

كائن حي
الماوس
الجنس
غير محدد
خصائص النمو
الملتزم
حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1
تفاصيل حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
مستوى السلامة البيولوجية
1

03الخصائص

نوع الخلية
بودوسيت

04المعرّفات

المرجع
SVI (الرقم الكتالوجي لسيتيون 400495)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
10090
سيلوصور
CVCL_5943

05التعبير والقابلية للإصابة

التعبير البروتيني
WT1، وLmx1b، وLmx1b، وNephrin، وNepHI، وFAT، وP-cadherin، وCD2AP، وZO-I، وPodocalyxin، وPodoplanin، وSynpo، وPodocin، وTRPC6، وGAPDH.

06التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
RPMI 1640، ث: 2.0 مللي مولار جلوتامين مستقر، ث: 2.0 جم/لتر NaHCO3 (رقم المادة 820700a من سايتيون)
بيئة الحضانة

33 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
قم بتزويد الوسط ب 10٪ من ال FBS
كاشف التفكك
أكوتاس
إعادة الاستنبات
قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
كثافة البذر
قم بتلقيح قوارير زراعة الخلايا T75 بـ 1x 104 خلية/سم2 (حوالي 60.000 خلية/مل، 12 مل من الوسط في قارورة T75 واحدة) من أجل عملية التكاثر. حافظ على الخلايا عند درجة حرارة 33 درجة مئوية / 5٪ ثاني أكسيد الكربون، حتى تصل القارورة إلى حوالي 75٪ من التكاثر.
تجديد السوائل
3 مرات في الأسبوع
إذابة الثلج والزراعة

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

العقم

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

08المانح

السلالة / النوع الفرعي
(CBA/Ca x C57BL/10) Tg(H2KbtsA58) Immort
عمر المتبرع
للبالغين