Przejdź do treści
SVI
Chusteczka
Nerka

Dokumenty

SVI

Cell line · Numer produktu 400495

Linia komórkowa SVI została wyklonowana z rozrostu kłębuszków nerkowych wyizolowanych od myszy transgenicznych H-2kb-tsA58. Myszy te są nosicielami genu wrażliwego na temperaturę...

€800.00bez podatku i kosztów wysyłki
W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
1

01Informacje ogólne

Opis
Linia komórkowa SVI została sklonowana z wyrostka kłębuszków nerkowych, które zostały wyizolowane z transgenicznych myszy H-2kb-tsA58. Myszy te są nosicielami wrażliwego na temperaturę wariantu antygenu SV40 large T pod kontrolą promotora H-2kb indukowanego przez IFN-g. Komórki proliferują w temperaturze 33 stopni Celsjusza i różnicują się w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Obecnie komórki były z powodzeniem hodowane przez ponad 40 pasaży bez odnotowania zmian fenotypowych. SVI są bardzo podobne do E11 pod względem morfologii i ekspresji kilku markerów. Na przykład podocyna i WT1 są wyrażane w mniejszym stopniu w porównaniu do E11. Różnicowanie: Rozpocząć proces różnicowania poprzez umieszczenie kolby (kolb) w inkubatorze w temperaturze 38 stopni Celsjusza / 5% CO2 na co najmniej 14 dni w celu zakończenia różnicowania. Dodanie interferonu-gamma (INF-gamma) nie jest konieczne.
Chusteczka
Nerka

02Klasyfikacja

Organizm
Mysz
Seks
Nieokreślone
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Status GMO
GMO-S1
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Typ komórki
Podocyt

04Identyfikatory

Źródło
SVI (numer katalogowy Cytion 400495)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Ekspresja i podatność

Ekspresja białek
WT1, Lmx1b, nefryna, NEPHI, FAT, P-kadheryna, CD2AP, ZO-I, podokaliksyna, podoplanina, synpo, podocyna, TRPC6 i GAPDH.

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

33°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.
Gęstość wysiewu
W celu przeprowadzenia procesu proliferacji zaszczepić kolby hodowlane T75 komórkami w stężeniu 1x 104 komórek/cm2 (około 60 000 komórek/ml, 12 ml pożywki w jednej kolbie T75). Komórki należy przechowywać w temperaturze 33°C / 5% CO2, aż do osiągnięcia około 75% konfluencji w kolbie.
Odnawianie płynów
3 razy w tygodniu
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Rasa / podgatunek
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Wiek dawcy
Dorosły