Preskoči na vsebino
SVI
Tkivo
Ledvice

Dokumenti

SVI

Cell line · Številka izdelka 400495

Celična linija SVI je bila klonirana iz izrastkov glomerulov, ki so bili izolirani iz transgenih miši H-2kb-tsA58. Te miši so nosilke temperaturno občutljivega...

€800.00brez davka in stroškov poštnine

Prilagajanje / Priporočila

Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
1

01Splošne informacije

Opis
Celična linija SVI je bila klonirana iz izrastka glomerulov, ki so bili izolirani iz transgenih miši H-2kb-tsA58. Te miši nosijo temperaturno občutljivo različico velikega T antigena SV40 pod nadzorom promotorja H-2kb, ki ga inducira IFN-g. Celice se razmnožujejo pri 33 stopinjah Celzija in diferencirajo pri 37 stopinjah Celzija. Trenutno so celice uspešno gojili več kot 40 pasaž, ne da bi opazili fenotipske spremembe. SVI so po morfologiji in izražanju več označevalcev zelo podobne celicam E11. Na primer, podocin in WT1 sta izražena v manjši meri kot pri E11. Diferenciacija: Diferenciacijo začnite tako, da nekonfluentne erlenmajerice postavite v inkubator pri 38 stopinjah Celzija / 5 % CO2 za najmanj 14 dni, da se diferenciacija zaključi. Dodajanje interferona gama (INF-gama) ni potrebno.
Tkivo
Ledvice

02Razvrstitev

Organizem
Miška
Seks
Ni navedeno
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GSO
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Vrsta celice
Podociti

04Identifikatorji

Navajanje vira
SVI (kataloška številka Cytion 400495)
Davčna identifikacijska številka NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija beljakovin
WT1, Lmx1b, nefrin, NEPHI, FAT, P-kaderin, CD2AP, ZO-I, podokaliksin, podoplanin, synpo, podocin, TRPC6 in GAPDH.

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnega glutamina, w: 2,0 g/L NaHCO3 (številka izdelka Cytion 820700a)
Inkubacijska atmosfera

33 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Gostota setve
Za proces proliferacije inokulirajte kolbe za celično kulturo T75 z 1x 104 celicami/cm2 (približno 60.000 celic/ml, 12 ml gojišča v eni kolbi T75). Celice hranite pri temperaturi 33 °C / 5 % CO2, dokler kolba ni približno 75 % konfluentna.
Obnova tekočine
3-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Pasma / podvrsta
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Starost darovalca
Odrasli