Mine otse sisu juurde
SVI
Kude
Neerud

Dokumendid

SVI

Cell line · Toote number 400495

SVI rakuliin on kloonitud H-2kb-tsA58 transgeensetelt hiirtelt isoleeritud glomerulite kasvust. Nendel hiirtel on temperatuuritundlik...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus
SVI rakuliin on kloonitud H-2kb-tsA58 transgeensetest hiirtest isoleeritud glomerulite kasvust. Need hiired kannavad SV40 suure T antigeeni temperatuuritundlikku varianti IFN-g-indutseeritava H-2kb promootori kontrolli all. Rakud paljunevad 33 °C juures ja diferentseeruvad 37 °C juures. Praegu on rakke edukalt kasvatatud rohkem kui 40 läbimise ajal, ilma et oleks täheldatud fenotüüpseid muutusi. SVI on morfoloogia ja mitmete markerite ekspressiooni poolest väga sarnased E11-ga. Näiteks podocin ja WT1 on E11-ga võrreldes vähem ekspresseeritud. Diferentseerumine: Alustage diferentseerimisprotsessi, asetades mitte-confluentsed kolvid inkubaatorisse 38 kraadi Celsiuse järgi / 5% CO2 vähemalt 14 päevaks, et diferentseerumine oleks lõpule viidud. Interferoon-gamma (INF-gamma) lisamine ei ole vajalik.
Kude
Neerud

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Määratlemata
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Rakutüüp
Podotsüüdid

04Tunnused

Viide
SVI (Cytioni katalooginumber 400495)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Valgu ekspressioon
WT1, Lmx1b, nefriin, NEPHI, FAT, P-kadheriin, CD2AP, ZO-I, podokalüksin, podoplaniin, sünpo, podokiin, TRPC6 ja GAPDH.

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

33°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
Inokuleerige T75 rakukultuuri kolvid 1x 104 rakuga/cm2 (umbes 60 000 rakku/ml, 12 ml keskkonda ühes T75-s) proliferatsiooni protsessi jaoks. Hoidke rakke 33 °C juures / 5% CO2-s, kuni kolv on umbes 75% konfluentne.
Vedeliku vahetus
3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Doonori vanus
Täiskasvanud