Prejsť na obsah
SVI
Tkanivo
Obličky

Dokumenty

SVI

Cell line · Číslo výrobku 400495

Bunka SVI bola klonovaná z výrastkov glomerulov, ktoré boli izolované z transgénnych myší H-2kb-tsA58. Tieto myši sú nositeľmi teplotne citlivého...

€800.00bez DPH a poštovného

Prispôsobenie / Odporúčania

Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
1

01Všeobecné informácie

Popis
Bunková línia SVI bola klonovaná z výrastkov glomerulov, ktoré boli izolované z transgénnych myší H-2kb-tsA58. Tieto myši nesú teplotne citlivý variant veľkého T antigénu SV40 pod kontrolou promótora H-2kb indukovaného IFN-g. Bunky sa množia pri teplote 33 stupňov Celzia a diferencujú sa pri teplote 37 stupňov Celzia. V súčasnosti sa bunky úspešne kultivujú viac ako 40 pasáží bez toho, aby sa zaznamenali fenotypové zmeny. SVI sú veľmi podobné E11 z hľadiska morfológie a expresie niekoľkých markerov. Napríklad podocín a WT1 sú v porovnaní s E11 exprimované v menšej miere. Diferenciácia: Proces diferenciácie začnite umiestnením nekonfluentnej banky (baniek) do inkubátora pri teplote 38 stupňov Celzia / 5 % CO2 na minimálne 14 dní na dokončenie diferenciácie. Pridanie interferónu-gamma (INF-gamma) nie je potrebné.
Tkanivo
Obličky

02Klasifikácia

Organizmus
Myš
Sex
Nešpecifikované
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o štatúte GMO
GMO-S1: This murine podocyte cell line (SVI) contains a conditionally active SV40 Large T-Antigen transgene as part of the ImmortoMouse model, supporting temperature-sensitive immortalization. The construct is stably present in podocyte-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Typ bunky
Podocyty

04Identifikátory

Citácia
SVI (katalógové číslo Cytion 400495)
Daňové identifikačné číslo NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5943

05Prejav a náchylnosť

Expresia proteínov
WT1, Lmx1b, nefrín, NEPHI, FAT, P-kadherín, CD2AP, ZO-I, podokalyxín, podoplanín, synpo, podocín, TRPC6 a GAPDH.

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilný glutamín, w: 2,0 g/L NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820700a)
Inkubačná atmosféra

33 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Hustota výsevu
Na účely proliferácie naočkujte kultivačné fľaše T75 s 1x 104 bunkami/cm2 (približne 60 000 buniek/ml, 12 ml média v jednej fľaši T75). Udržujte bunky pri teplote 33 °C / 5 % CO2, kým fľaša nedosiahne približne 75 % konfluencie.
Obnova kvapaliny
3-krát týždenne
Rozmrazovanie a kultivácia

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Plemeno / poddruh
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) Immort
Vek darcu
Dospelí