Tartalomra ugrás
RF/6A
Szövet
Agyhártya, retina
Betegség
Normális retinális choroidális endotélium (magzati; nem tumorogén)
Áttétes hely
Nem alkalmazható (normális magzati retinális choroidális endoteliális sejtvonal)

Dokumentumok

RF/6A

Cell line · Termékszám 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00adó és szállítási költség nélkül
Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

Az RF/6A egy rhesus makákó (Macaca mulatta) retinális choroidális endoteliális sejtvonal, amelyet magzati choroidális és retinális szövetből állítottak elő. A sejtvonal adhezív monorétegként növekszik, epitheliumszerű morfológiával. Az RF/6A sejtek megőrzik a legfontosabb endoteliális jellemzőket, beleértve a VIII-as faktor (von Willebrand-faktor), a fibronektin és az elektronmikroszkóppal kimutatható Weibel-Palade-granulátumok expresszióját – ez utóbbi megerősíti endoteliális jellegüket. A vonalat eredetileg a retinális és choroidális vascularizáció vizsgálatára hozták létre, és széles körben alkalmazzák főemlős endoteliális modellként a szemészeti angiogenezis kutatásában.

Az RF/6A alkalmazható a szem angiogenezisének kutatásában, a retinális és choroidális érrendszer kialakulásának vizsgálatában, az antiangiogén szerek (VEGF-gátlók, bevacizumab, ranibizumab) értékelésében, az életkorral összefüggő makuladegeneráció (AMD) modellezésére, a diabéteszes retinopátia biológiájának vizsgálatára, valamint a szem mikrokörnyezetében fellépő érrendszeri permeabilitás értékelésére. A nem emberi főemlős (NHP) eredetnek köszönhetően az RF/6A közelebb áll az emberi retinális érrendszer biológiájához, mint a rágcsáló endoteliális modellek, különösen a főemlős-specifikus VEGF-izoformák reakcióit és a szemészeti farmakológiát vizsgáló kutatások esetében. A vonalat széles körben használják csőképződési vizsgálatokban, migrációs vizsgálatokban és VEGF-stimulációs kísérletekben.

Szövet
Agyhártya, retina
Betegség
Normális retinális choroidális endotélium (magzati; nem tumorogén)
Áttétes hely
Nem alkalmazható (normális magzati retinális choroidális endoteliális sejtvonal)
Alkalmazások
A szem angiogenezisével kapcsolatos kutatások; a retinális és a choroidális érrendszer kialakulása; az anti-VEGF-terápia értékelése (bevacizumab, ranibizumab); az AMD és a diabéteszes retinopátia modellezése; csőképződési vizsgálatok; érrendszeri permeabilitás; NHP-főemlős retinális endoteliális modell

02Osztályozás

Organizmus
Rhesus makákó
Szex
Nem meghatározott
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-mentes
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelszerű
Sejttípus
Endothel sejtek
Kettőzési idő
kb. 24–36 óra

04Azonosítók

Hivatkozás
RF/6A (Cytion katalógusszám: 305150)
NCBI adóazonosító szám
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Kifejeződés és fogékonyság

Fehérjeexpresszió
Ⅷ faktor, fibronektin

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion cikkszám: 820100a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt 10% FBS-szel és 1% NEAA-val kell kiegészíteni
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Osztási arány
1–5
Ültetési sűrűség
1–2 × 10⁴ sejt/cm²
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Az olvadás utáni helyreállás
Felolvasztás után a sejteket 5 × 10⁴ sejt/cm² sűrűséggel ültessük be a tenyésztőedénybe, és az első tápközeg-csere előtt legalább 24 órát várjunk a tapadásra. Ne hagyjuk, hogy a tenyészetek teljes konfluenciát érjenek el, mivel a kontaktgátlás csökkentheti az endoteliális fenotípust.
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
Magzat
Etnikai hovatartozás
Nem alkalmazható (nem emberi főemlős sejtvonal; Macaca mulatta)