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RF/6A
Gewebe
Aderhaut, Netzhaut
Krankheit
Normales Aderhautendothel der Netzhaut (fötal; nicht tumorogen)
Metastasenherd
Nicht zutreffend (normale fetale Netzhaut-Aderhaut-Endothelzelllinie)

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RF/6A

Cell line · Artikelnummer 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

RF/6A ist eine aus fötalem Aderhaut- und Netzhautgewebe etablierte Endothelzelllinie der Aderhaut der Netzhaut des Rhesusmakaken (Macaca mulatta). Die Zelllinie wächst als adhärente Monoschicht mit epithelähnlicher Morphologie. RF/6A-Zellen weisen wichtige endotheliale Merkmale auf, darunter die Expression von Faktor VIII (von-Willebrand-Faktor), Fibronektin und Weibel-Palade-Granula, die elektronenmikroskopisch nachweisbar sind – wobei letztere ihre endotheliale Identität bestätigen. Die Zelllinie wurde ursprünglich für Untersuchungen zur Vaskularisierung der Netzhaut und der Aderhaut etabliert und hat sich als Primaten-Endothelmodell für die Forschung zur okulären Angiogenese weit verbreitet.

RF/6A eignet sich für die Forschung zur okulären Angiogenese, für Untersuchungen zur Vaskularisierung der Netzhaut und der Aderhaut, zur Bewertung von antiangiogenen Wirkstoffen (VEGF-Hemmer, Bevacizumab, Ranibizumab), zur Modellierung der altersbedingten Makuladegeneration (AMD), zur Erforschung der Biologie der diabetischen Retinopathie sowie zur Beurteilung der Gefäßpermeabilität in der mikrovaskulären Umgebung des Auges. Aufgrund seiner Herkunft aus nicht-menschlichen Primaten (NHP) ist RF/6A der Biologie der menschlichen Netzhautgefäße näher als Endothelmodelle aus Nagetieren, insbesondere für Studien zu primatenspezifischen Reaktionen auf VEGF-Isoformen und zur Augenpharmakologie. Die Zelllinie wird häufig in Röhrenbildungstests, Migrationstests und VEGF-Stimulationsexperimenten eingesetzt.

Gewebe
Aderhaut, Netzhaut
Krankheit
Normales Aderhautendothel der Netzhaut (fötal; nicht tumorogen)
Metastasenherd
Nicht zutreffend (normale fetale Netzhaut-Aderhaut-Endothelzelllinie)
Anwendungen
Forschung zur okulären Angiogenese; Vaskularisierung der Netzhaut und der Aderhaut; Bewertung der Anti-VEGF-Therapie (Bevacizumab, Ranibizumab); Modellierung von AMD und diabetischer Retinopathie; Tubusbildungsassays; Gefäßpermeabilität; Netzhautendothelmodell bei nichtmenschlichen Primaten (NHP)

02Klassifizierung

Organismus
Rhesusmakake
Sex
Nicht näher bezeichnet
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
Ohne Gentechnik
Angaben zum GVO-Status
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Endothelzellen
Verdopplungszeit
ca. 24 bis 36 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
RF/6A (Cytion Katalognummer 305150)
NCBI-Steuer-ID
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
Faktor Ⅷ, Fibronectin

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Split-Verhältnis
1 bis 5
Aussaatdichte
1 bis 2 × 10⁴ Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 × 10⁴ Zellen/cm² ausplattieren und vor dem ersten Mediumwechsel mindestens 24 Stunden für die Adhäsion einplanen. Die Kulturen dürfen keine vollständige Konfluenz erreichen, da eine Kontaktinhibition den endothelialen Phänotyp beeinträchtigen kann.
Auftauen und Kultivierung

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Fötus
Ethnische Zugehörigkeit
Nicht zutreffend (Zelllinie eines nicht-menschlichen Primaten; Macaca mulatta)