Preskoči na vsebino
RF/6A
Tkivo
Horoid, mrežnica
Bolezen
Normalni endotel mrežnice in horioideje (plodovni; netumorigeničen)
Mesto metastaze
Ni relevantno (normalna linija celic endotelija horioideje plodove mrežnice)

Dokumenti

RF/6A

Cell line · Številka izdelka 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

RF/6A je linija endotelijskih celic horioideje mrežnice makaka rhesusa (Macaca mulatta), vzpostavljena iz tkiva horioideje in mrežnice ploda. Linija raste kot adhezivni monosloj z epitelijsko podobno morfologijo. Celice RF/6A ohranjajo ključne endotelijske značilnosti, vključno z izražanjem faktorja VIII (von Willebrandovega faktorja), fibronektina in Weibel-Paladejevih granul, ki jih je mogoče zaznati z elektronskim mikroskopom – slednje potrjuje njihovo endotelijsko identiteto. Linija je bila prvotno vzpostavljena za študije vaskularizacije mrežnice in horioideje ter se je široko uveljavila kot model endotelijskih celic primatov za raziskave očesne angiogeneze.

RF/6A se uporablja v raziskavah očesne angiogeneze, študijah vaskularizacije mrežnice in horioideje, pri ocenjevanju antiangiogenih sredstev (zaviralci VEGF, bevacizumab, ranibizumab), modeliranje starostne makularne degeneracije (AMD), biologijo diabetične retinopatije ter oceno vaskularne permeabilnosti v očesnem mikrookolju. Ker izvira iz nečloveških primatov (NHP), je linija RF/6A bližje biologiji človeških mrežničnih žil kot endotelijski modeli glodalcev, zlasti pri raziskavah, ki vključujejo odzive na izoforme VEGF, specifične za primate, ter oftalmološko farmakologijo. Linija se pogosto uporablja v testih tvorbe cevk, testih migracije in poskusih stimulacije z VEGF.

Tkivo
Horoid, mrežnica
Bolezen
Normalni endotel mrežnice in horioideje (plodovni; netumorigeničen)
Mesto metastaze
Ni relevantno (normalna linija celic endotelija horioideje plodove mrežnice)
Uporaba
Raziskave na področju očesne angiogeneze; vaskularizacija mrežnice in horioideje; ocena terapije z anti-VEGF zdravili (bevacizumab, ranibizumab); modeliranje AMD in diabetične retinopatije; preskusi tvorbe cevk; vaskularna permeabilnost; model endotelija mrežnice pri primatih NHP

02Razvrstitev

Organizem
Rhesusov makak
Seks
Ni navedeno
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
Brez gensko spremenjenih organizmov
Podrobnosti o statusu GSO
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelijam podobni
Vrsta celice
Endotelijske celice
Čas podvojitve
približno 24 do 36 ur

04Identifikatorji

Navajanje vira
RF/6A (kataloška številka Cytion 305150)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija beljakovin
Faktor Ⅷ, fibronektin

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (številka izdelka Cytion 820100a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS in 1 % NEAA
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Razmerje delitve
1 do 5
Gostota setve
1 do 2 × 10⁴ celic/cm²
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Obnova po odtaljevanju
Po odmrznitvi celice razporedite po ploščah v gostoti 5 × 10⁴ celic/cm² in pred prvo zamenjavo gojišča počakajte vsaj 24 ur, da se celice prilepijo. Ne dopustite, da bi kulture dosegle popolno konfluenco, saj lahko kontaktna inhibicija zmanjša endotelijski fenotip.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
Plod
Etnična pripadnost
Ni relevantno (celična linija nečloveških primatov; Macaca mulatta)