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RF/6A
Pañuelo de papel
Coroides, retina
Enfermedad
Endotelio coroideo retiniano normal (fetal; no tumorigénico)
Lugar de metástasis
No aplicable (línea celular endotelial coroidea retiniana fetal normal)

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RF/6A

Cell line · Número de producto 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

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01Información general

Descripción

RF/6A es una línea celular de endotelio coroideo retiniano de macaco rhesus (Macaca mulatta) obtenida a partir de tejido fetal de la coroides y la retina. La línea crece en forma de monocapa adherente con morfología de tipo epitelial. Las células RF/6A conservan características endoteliales clave, como la expresión del factor VIII (factor de von Willebrand), la fibronectina y los gránulos de Weibel-Palade, detectables mediante microscopía electrónica; estos últimos confirman su identidad endotelial. La línea se estableció originalmente para estudios sobre la vascularización retiniana y coroidea y se ha adoptado ampliamente como modelo endotelial de primates para la investigación sobre la angiogénesis ocular.

La línea RF/6A es aplicable a la investigación sobre la angiogénesis ocular, a los estudios de la vascularización retiniana y coroidea, a la evaluación de agentes antiangiogénicos (inhibidores del VEGF, bevacizumab, ranibizumab), la modelización de la degeneración macular relacionada con la edad (DMAE), la biología de la retinopatía diabética y la evaluación de la permeabilidad vascular en el microambiente ocular. Su origen en primates no humanos (NHP) hace que la línea RF/6A se acerque más a la biología vascular de la retina humana que los modelos endoteliales de roedores, especialmente en estudios relacionados con las respuestas a isoformas del VEGF específicas de los primates y la farmacología ocular. Esta línea se utiliza habitualmente en ensayos de formación de tubos, ensayos de migración y experimentos de estimulación con VEGF.

Pañuelo de papel
Coroides, retina
Enfermedad
Endotelio coroideo retiniano normal (fetal; no tumorigénico)
Lugar de metástasis
No aplicable (línea celular endotelial coroidea retiniana fetal normal)
Aplicaciones
Investigación sobre la angiogénesis ocular; vascularización retiniana y coroidea; evaluación de la terapia anti-VEGF (bevacizumab, ranibizumab); modelos de DMAE y retinopatía diabética; ensayos de formación de tubos; permeabilidad vascular; modelo endotelial retiniano en primates NHP

02Clasificación

Organismo
Macaco rhesus
Sexo
Sin especificar
Propiedades de crecimiento
Adherente
Situación respecto a los OMG
Sin OGM
Detalles sobre la presencia de OMG
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Morfología
De tipo epitelial
Tipo de célula
Células endoteliales
Tiempo de duplicación
entre 24 y 36 horas, aproximadamente

04Identificadores

Referencia
RF/6A (número de catálogo de Cytion 305150)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Expresión y susceptibilidad

Expresión de proteínas
Factor Ⅷ, Fibronectina

06Manejo y cultivo

Medio de cultivo
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (número de artículo de Cytion 820100a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Suplementar el medio con un 10% de FBS y un 1% de NEAA
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Relación de división
Del 1 al 5
Densidad de siembra
De 1 a 2 × 10⁴ células/cm²
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Recuperación tras la descongelación
Tras la descongelación, siembre las células a una densidad de 5 × 10⁴ células/cm² y deje que se adhieran durante al menos 24 horas antes del primer cambio de medio. No permita que los cultivos alcancen la confluencia total, ya que la inhibición por contacto podría reducir el fenotipo endotelial.
Descongelación y cultivo

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

08Donante

Edad del donante
Feto
Origen étnico
No aplicable (línea celular de primates no humanos; Macaca mulatta)