Μετάβαση στο περιεχόμενο
RF/6A
Ιστός
Χοριοειδής, αμφιβληστροειδής
Ασθένεια
Φυσιολογικό ενδοθήλιο του χοριοειδούς του αμφιβληστροειδούς (εμβρυϊκό· μη καρκινογόνο)
Θέση μετάστασης
Δεν ισχύει (φυσιολογική σειρά κυττάρων του ενδοθηλίου της χοριοειδούς του αμφιβληστροειδούς του εμβρύου)

Έγγραφα

RF/6A

Cell line · Αριθμός προϊόντος 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
  • CoA
  • CoA
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η RF/6A είναι μια κυτταρική σειρά ενδοθηλιακών κυττάρων του χοριοειδούς του αμφιβληστροειδούς του μακάκου ρέζους (Macaca mulatta), η οποία δημιουργήθηκε από εμβρυϊκό ιστό του χοριοειδούς και του αμφιβληστροειδούς. Η σειρά αναπτύσσεται ως προσκολλητική μονοστρωματική καλλιέργεια με μορφολογία παρόμοια με αυτή του επιθηλίου. Τα κύτταρα RF/6A διατηρούν βασικά ενδοθηλιακά χαρακτηριστικά, συμπεριλαμβανομένης της έκφρασης του Παράγοντα VIII (παράγοντας von Willebrand), της ινονεκτίνης και των κόκκων Weibel-Palade, οι οποίοι είναι ανιχνεύσιμοι με ηλεκτρονική μικροσκοπία — με τους τελευταίους να επιβεβαιώνουν την ενδοθηλιακή τους ταυτότητα. Η σειρά δημιουργήθηκε αρχικά για μελέτες της αγγειογένεσης του αμφιβληστροειδούς και της χοριοειδούς μεμβράνης και έχει υιοθετηθεί ευρέως ως μοντέλο ενδοθηλιακών κυττάρων πρωτευόντων για την έρευνα στην οφθαλμική αγγειογένεση.

Η RF/6A μπορεί να εφαρμοστεί στην έρευνα της οφθαλμικής αγγειογένεσης, σε μελέτες της αγγειοποίησης του αμφιβληστροειδούς και του χοριοειδούς, στην αξιολόγηση αντι-αγγειογενετικών παραγόντων (αναστολείς VEGF, bevacizumab, ranibizumab), στη μοντελοποίηση της ηλικιακής εκφύλισης της ωχράς κηλίδας (AMD), στη βιολογία της διαβητικής αμφιβληστροειδοπάθειας και στην αξιολόγηση της αγγειακής διαπερατότητας στο οφθαλμικό μικροπεριβάλλον. Η προέλευσή του από μη ανθρώπινα πρωτεύοντα (NHP) καθιστά το RF/6A πιο κοντά στη βιολογία των αγγείων του ανθρώπινου αμφιβληστροειδούς σε σύγκριση με τα ενδοθηλιακά μοντέλα τρωκτικών, ιδίως για μελέτες που αφορούν τις ειδικές για τα πρωτεύοντα αντιδράσεις των ισομορφών του VEGF και την οφθαλμική φαρμακολογία. Η σειρά χρησιμοποιείται συνήθως σε δοκιμασίες σχηματισμού σωληναρίων, δοκιμασίες μετανάστευσης και πειράματα διέγερσης με VEGF.

Ιστός
Χοριοειδής, αμφιβληστροειδής
Ασθένεια
Φυσιολογικό ενδοθήλιο του χοριοειδούς του αμφιβληστροειδούς (εμβρυϊκό· μη καρκινογόνο)
Θέση μετάστασης
Δεν ισχύει (φυσιολογική σειρά κυττάρων του ενδοθηλίου της χοριοειδούς του αμφιβληστροειδούς του εμβρύου)
Εφαρμογές
Έρευνα στην οφθαλμική αγγειογένεση· αγγειοποίηση του αμφιβληστροειδούς και της χοριοειδούς· αξιολόγηση της θεραπείας με αντι-VEGF (bevacizumab, ranibizumab)· μοντελοποίηση της ηλικιακής εκφύλισης της ωχράς κηλίδας (AMD) και της διαβητικής αμφιβληστροειδοπάθειας· δοκιμασίες σχηματισμού σωληναρίων· αγγειακή διαπερατότητα· μοντέλο ενδοθηλίου του αμφιβληστροειδούς σε πρωτεύοντα θηλαστικά (NHP)

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Μακάκος Ρέζους
Σεξ
Μη καθορισμένο
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
Χωρίς ΓΤΟ
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιοειδής
Τύπος κυττάρου
Ενδοθηλιακά κύτταρα
Χρόνος διπλασιασμού
περίπου 24 έως 36 ώρες

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
RF/6A (αριθμός καταλόγου Cytion 305150)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9544
Κελλοσαύρος
CVCL_4552

05Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
Παράγοντας Ⅷ, ινωδονεκτίνη

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-γλουταμίνη, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (αριθμός άρθρου Cytion 820100a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS και 1% NEAA
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Αναλογία διαχωρισμού
1 έως 5
Πυκνότητα σποράς
1 έως 2 × 10⁴ κύτταρα/cm²
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Ανάκαμψη μετά την απόψυξη
Μετά την απόψυξη, μεταφέρετε τα κύτταρα σε πλάκα με πυκνότητα 5 × 10⁴ κύτταρα/cm² και αφήστε τα να προσκολληθούν για τουλάχιστον 24 ώρες πριν από την πρώτη αλλαγή του θρεπτικού μέσου. Μην αφήνετε τις καλλιέργειες να φτάσουν σε πλήρη σύγκλιση, καθώς η αναστολή επαφής ενδέχεται να μειώσει τον ενδοθηλιακό φαινότυπο.
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
Έμβρυο
Εθνικότητα
Δεν ισχύει (κυτταρική σειρά πρωτευόντων μη ανθρώπινων ειδών· Macaca mulatta)