Gå til innholdet
RF/6A
Vev
Årehinne, netthinne
Sykdom
Normalt endotel i netthinnens koroid (foster; ikke-tumorbildende)
Metastaseområde
Ikke relevant (normal cellelinje fra endotelceller i netthinnens koroid hos foster)

Dokumenter

RF/6A

Cell line · Produktnummer 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00ekskl. mva. og frakt

Tilpasning / Anbefalinger

På lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
  • CoA
  • CoA
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

RF/6A er en cellelinje av endotelceller fra netthinnen og årehinnen hos rhesusmakak (Macaca mulatta), etablert fra fostervev fra årehinnen og netthinnen. Cellelinjen vokser som et vedheftende monolag med epitelignende morfologi. RF/6A-celler beholder viktige endotelkarakteristika, inkludert uttrykk av faktor VIII (von Willebrand-faktor), fibronektin og Weibel-Palade-granuler som kan påvises ved hjelp av elektronmikroskopi — det siste bekrefter deres endotelidentitet. Linjen ble opprinnelig etablert for studier av vaskularisering i netthinnen og koroiden og har blitt mye brukt som en primat-endotelmodell for forskning på okulær angiogenese.

RF/6A kan brukes i forskning på okulær angiogenese, studier av vaskularisering i netthinnen og årehinnen, evaluering av antiangiogene midler (VEGF-hemmere, bevacizumab, ranibizumab), modellering av aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD), biologi knyttet til diabetisk retinopati og vurdering av vaskulær permeabilitet i det okulære mikromiljøet. Opprinnelsen fra ikke-menneskelige primater (NHP) gjør at RF/6A ligger nærmere den menneskelige netthinnevaskulære biologien enn endotelmodeller fra gnagere, særlig for studier som omfatter primatspesifikke VEGF-isoformresponser og okulær farmakologi. Linjen brukes ofte i rørdannelsesassayer, migrasjonsassayer og VEGF-stimuleringseksperimenter.

Vev
Årehinne, netthinne
Sykdom
Normalt endotel i netthinnens koroid (foster; ikke-tumorbildende)
Metastaseområde
Ikke relevant (normal cellelinje fra endotelceller i netthinnens koroid hos foster)
Søknader
Forskning på okulær angiogenese; vaskularisering av netthinnen og årehinnen; evaluering av anti-VEGF-behandling (bevacizumab, ranibizumab); modellering av AMD og diabetisk retinopati; rørdannelsesforsøk; vaskulær permeabilitet; endotelmodell fra netthinnen hos NHP-primater

02Klassifisering

Organisme
Rhesusmakak
Sex
Uspesifisert
Vekstegenskaper
Tilhenger
GMO-status
Uten GMO
Detaljer om GMO-status
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende
Celletype
Endotelceller
Fordoblingstid
ca. 24 til 36 timer

04Identifikatorer

Kildehenvisning
RF/6A (Cytion-katalognummer 305150)
NCBI-skattenummer
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Uttrykk og mottakelighet

Proteinekspresjon
Faktor Ⅷ, fibronektin

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
EMEM (MEM Eagle), m: 2 mM L-Glutamin, m: 2,2 g/L NaHCO3, m: EBSS (Cytion artikkelnummer 820100a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS og 1 % NEAA
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Oppdelingsforhold
1 til 5
Såtetthet
1 til 2 × 10⁴ celler/cm²
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Gjenoppretting etter tining
Etter opptining skal cellene sås med en tetthet på 5 × 10⁴ celler/cm², og det må gis minst 24 timer til vedheft før det første medieskiftet. La ikke kulturene nå full konfluens, da kontaktinhibisjon kan redusere endotelfenotypen.
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
Foster
Etnisitet
Ikke relevant (cellelinje fra ikke-menneskelig primat; Macaca mulatta)