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RF/6A
Tessuto
Coroide, retina
Malattia
Endotelio coroidale retinico normale (fetale; non tumorigenico)
Sito metastatico
Non applicabile (linea cellulare endoteliale coroidale retinica fetale normale)

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RF/6A

Cell line · Codice prodotto 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00IVA e spese di spedizione escluse

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01Informazioni generali

Descrizione

RF/6A è una linea cellulare endoteliale coroidale retinica di macaco rhesus (Macaca mulatta) ottenuta da tessuto fetale della coroide e della retina. La linea cresce come monostrato aderente con morfologia di tipo epiteliale. Le cellule RF/6A conservano caratteristiche endoteliali fondamentali, tra cui l’espressione del Fattore VIII (fattore di von Willebrand), della fibronectina e dei granuli di Weibel-Palade rilevabili al microscopio elettronico — questi ultimi confermano la loro identità endoteliale. La linea è stata originariamente ottenuta per studi sulla vascolarizzazione retinica e coroidale ed è stata ampiamente adottata come modello endoteliale dei primati per la ricerca sull’angiogenesi oculare.

RF/6A è applicabile nella ricerca sull’angiogenesi oculare, negli studi sulla vascolarizzazione retinica e coroidale, nella valutazione di agenti antiangiogenici (inibitori del VEGF, bevacizumab, ranibizumab), modellizzazione della degenerazione maculare senile (AMD), biologia della retinopatia diabetica e valutazione della permeabilità vascolare nel microambiente oculare. L’origine da primati non umani (NHP) rende la linea RF/6A più affine alla biologia vascolare retinica umana rispetto ai modelli endoteliali dei roditori, in particolare per gli studi che coinvolgono le risposte delle isoforme del VEGF specifiche dei primati e la farmacologia oculare. La linea è comunemente utilizzata in saggi di formazione di tubi, saggi di migrazione ed esperimenti di stimolazione con VEGF.

Tessuto
Coroide, retina
Malattia
Endotelio coroidale retinico normale (fetale; non tumorigenico)
Sito metastatico
Non applicabile (linea cellulare endoteliale coroidale retinica fetale normale)
Applicazioni
Ricerca sull’angiogenesi oculare; vascolarizzazione retinica e coroidale; valutazione della terapia anti-VEGF (bevacizumab, ranibizumab); modellizzazione dell’AMD e della retinopatia diabetica; test di formazione di tubuli; permeabilità vascolare; modello endoteliale retinico nei primati NHP

02Classificazione

Organismo
Macaco rhesus
Sesso
Non specificato
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
Senza OGM
Dettagli sullo stato degli OGM
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Cellule endoteliali
Tempo di raddoppio
circa da 24 a 36 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
RF/6A (numero di catalogo Cytion 305150)
Codice fiscale NCBI
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Fattore Ⅷ, Fibronectina

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rapporto di frazionamento
Da 1 a 5
Densità di semina
da 1 a 2 × 10⁴ cellule/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, seminare le cellule a una densità di 5 × 10⁴ cellule/cm² e attendere almeno 24 ore affinché aderiscano prima del primo cambio di terreno di coltura. Evitare che le colture raggiungano la piena confluenza, poiché l’inibizione da contatto potrebbe ridurre il fenotipo endoteliale.
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Feto
Etnia
Non applicabile (linea cellulare di primati non umani; Macaca mulatta)