Přejít na obsah
RF/6A
Tkáň
Cévnatka, sítnice
Nemoc
Normální endotel sítnice a cévnatky (fetální; netumorogenní)
Místo metastázy
Neplatí (normální buněčná linie endoteliálních buněk choroidální vrstvy sítnice plodu)

Dokumenty

RF/6A

Cell line · Číslo výrobku 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis

RF/6A je buněčná linie endoteliálních buněk sítnice a cévnatky makaka rhesus (Macaca mulatta), získaná z fetální tkáně cévnatky a sítnice. Tato buněčná linie roste jako adhezivní monovrstva s epiteliální morfologií. Buňky RF/6A si zachovávají klíčové endoteliální charakteristiky, včetně exprese faktoru VIII (von Willebrandův faktor), fibronektinu a Weibel-Paladeho granulí detekovatelných elektronovou mikroskopií – přičemž právě tyto granule potvrzují jejich endoteliální identitu. Tato buněčná linie byla původně vytvořena pro studium vaskularizace sítnice a cévnatky a je široce využívána jako model endotelu primátů pro výzkum oční angiogeneze.

RF/6A je použitelná ve výzkumu oční angiogeneze, ve studiích vaskularizace sítnice a cévnatky, při hodnocení antiangiogenních látek (inhibitorů VEGF, bevacizumabu, ranibizumabu), modelování věkem podmíněné makulární degenerace (AMD), biologie diabetické retinopatie a hodnocení vaskulární permeability v očním mikroprostředí. Díky svému původu z nehumánních primátů (NHP) je linie RF/6A blíže biologii cévní sítě lidské sítnice než endoteliální modely hlodavců, zejména pro studie zahrnující reakce na izoformy VEGF specifické pro primáty a oční farmakologii. Tato linie se běžně používá v testech tvorby trubiček, testech migrace a experimentech se stimulací VEGF.

Tkáň
Cévnatka, sítnice
Nemoc
Normální endotel sítnice a cévnatky (fetální; netumorogenní)
Místo metastázy
Neplatí (normální buněčná linie endoteliálních buněk choroidální vrstvy sítnice plodu)
Aplikace
Výzkum oční angiogeneze; vaskularizace sítnice a cévnatky; hodnocení terapie anti-VEGF (bevacizumab, ranibizumab); modelování AMD a diabetické retinopatie; testy tvorby trubiček; vaskulární permeabilita; model endotelu sítnice primátů z řádu NHP

02Klasifikace

Organismus
makak rhesus
Sex
Nespecifikováno
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
Bez GMO
Podrobnosti o statusu GMO
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelu podobné
Typ buňky
Endoteliální buňky
Doba zdvojnásobení
přibližně 24 až 36 hodin

04Identifikátory

Citace
RF/6A (katalogové číslo Cytion 305150)
Daňové identifikační číslo NCBI
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Exprese a náchylnost

Exprese proteinů
Faktor Ⅷ, fibronektin

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/l NaHCO3, w: EBSS (číslo článku Cytion 820100a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS a 1 % NEAA
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Poměr rozdělení
1 až 5
Hustota výsevu
1 až 2 × 10⁴ buněk/cm²
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Po rozmrazení naneste buňky na kultivační misky v hustotě 5 × 10⁴ buněk/cm² a před první výměnou média vyčkejte alespoň 24 hodin, aby se buňky přichytily. Nedovolte, aby kultury dosáhly plné konfluence, protože kontaktní inhibice může oslabit endoteliální fenotyp.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
Plod
Etnická příslušnost
Nevztahuje se (buněčná linie primáta jiného než člověka; Macaca mulatta)