Pāriet uz saturu
RF/6A
Audums
Dzīslenē, tīklene
Slimība
Normāls tīklenes horoidālais endotēlijs (augļa; netumorogēns)
Metastāžu vieta
Neattiecas (normāla augļa tīklenes un asinsvadu apvalka endotēlija šūnu līnija)

Dokumenti

RF/6A

Cell line · Preces numurs 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

RF/6A ir rēzusmakaku (Macaca mulatta) tīklenes un coroīdas endotēlija šūnu līnija, kas izveidota no augļa coroīdas un tīklenes audiem. Šī līnija aug kā adhezīva monoslāņa kultūra ar epitēlijam līdzīgu morfoloģiju. RF/6A šūnas saglabā galvenās endotēlija īpašības, tostarp VIII faktora (von Willebrand faktora), fibronektīna un Weibel-Palade granulu ekspresiju, kas ir nosakāma ar elektronmikroskopiju — pēdējā no tām apstiprina šo šūnu endotēlija identitāti. Sākotnēji šī līnija tika izveidota tīklenes un horioīdas vaskularizācijas pētījumiem, un tā ir plaši pieņemta kā primātu endotēlija modelis acs angiogēnēzes pētījumiem.

RF/6A ir piemērota acs angiogēnēzes pētījumiem, tīklenes un horioīdas vaskularizācijas pētījumiem, antiangiogēno līdzekļu (VEGF inhibitori, bevacizumabs, ranibizumabs) novērtēšanai, ar vecumu saistītās makulas deģenerācijas (AMD) modelēšanai, diabētiskās retinopātijas bioloģijas izpētei un asinsvadu caurlaidības novērtēšanai acs mikrovidē. Tā kā RF/6A ir cēlusies no primātiem (NHP), tā ir tuvāka cilvēka tīklenes asinsvadu bioloģijai nekā grauzēju endotēlija modeļi, it īpaši pētījumos, kuros tiek izpētītas primātiem raksturīgās VEGF izoformu reakcijas un acu farmakoloģija. Šo šūnu līniju parasti izmanto cauruļveida struktūru veidošanās testos, migrācijas testos un VEGF stimulācijas eksperimentos.

Audums
Dzīslenē, tīklene
Slimība
Normāls tīklenes horoidālais endotēlijs (augļa; netumorogēns)
Metastāžu vieta
Neattiecas (normāla augļa tīklenes un asinsvadu apvalka endotēlija šūnu līnija)
Pieteikumi
Pētījumi par acu angiogēnēzi; tīklenes un horioīdas vaskularizācija; anti-VEGF terapijas novērtēšana (bevacizumabs, ranibizumabs); AMD un diabētiskās retinopātijas modelēšana; caurulīšu veidošanās testi; asinsvadu caurlaidība; NHP primātu tīklenes endotēlija modelis

02Klasifikācija

Organisms
Rēzusmakaks
Sekss
Nav norādīts
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
Bez ĢMO
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Šūnu tips
Endotēlija šūnas
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
aptuveni 24 līdz 36 stundas

04Identifikatori

Atsauce
RF/6A (Cytion kataloga numurs 305150)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
Faktors Ⅷ, fibronektīns

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sadalījuma attiecība
no 1 līdz 5
Sēšanas blīvums
1 līdz 2 × 10⁴ šūnas/cm²
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izsējiet šūnas ar blīvumu 5 × 10⁴ šūnas/cm² un pirms pirmās barotnes nomaiņas ļaujiet tām vismaz 24 stundas pielipt pie virsmas. Neļaujiet kultūrām sasniegt pilnīgu konfluenci, jo kontakta inhibīcija var samazināt endotēlija fenotipu.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
Auglis
Etniskā piederība
Neattiecas (cilvēkam nepiederoša primātu šūnu līnija; Macaca mulatta)