Przejdź do treści
RF/6A
Chusteczka
Naczyniówka, siatkówka
Choroba
Prawidłowy śródbłonek naczyniówki siatkówki (płodowy; nie nowotworowy)
Miejsce przerzutów
Nie dotyczy (normalna linia komórek śródbłonka naczyniówki siatkówki płodu)

Dokumenty

RF/6A

Cell line · Numer produktu 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00bez podatku i kosztów wysyłki
W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

RF/6A to linia komórek śródbłonka naczyniówki i siatkówki makaka rezusa (Macaca mulatta), wyhodowana z tkanki naczyniówki i siatkówki płodu. Linia ta rośnie w postaci przylegającej monowarstwy o morfologii przypominającej nabłonek. Komórki RF/6A zachowują kluczowe cechy śródbłonka, w tym ekspresję czynnika VIII (czynnika von Willebranda), fibronektyny oraz ziarnistości Weibela-Palade'a wykrywalnych za pomocą mikroskopii elektronowej — te ostatnie potwierdzają ich śródbłonkową tożsamość. Linia ta została pierwotnie wyhodowana do badań nad unaczynieniem siatkówki i naczyniówki i jest powszechnie stosowana jako model śródbłonka naczelnych w badaniach nad angiogenezą oczną.

RF/6A ma zastosowanie w badaniach nad angiogenezą oczną, badaniach unaczynienia siatkówki i naczyniówki, ocenie środków antyangiogennych (inhibitorów VEGF, bewacyzumabu, ranibizumabu), modelowania zwyrodnienia plamki związanego z wiekiem (AMD), biologii retinopatii cukrzycowej oraz oceny przepuszczalności naczyniowej w mikrośrodowisku oka. Pochodzenie z grupy naczelnych innych niż człowiek (NHP) sprawia, że linia RF/6A jest bliższa biologii naczyń siatkówki człowieka niż modele śródbłonka gryzoni, szczególnie w badaniach dotyczących specyficznych dla naczelnych odpowiedzi izoform VEGF oraz farmakologii oka. Linia ta jest powszechnie stosowana w testach tworzenia rurek, testach migracji oraz eksperymentach ze stymulacją VEGF.

Chusteczka
Naczyniówka, siatkówka
Choroba
Prawidłowy śródbłonek naczyniówki siatkówki (płodowy; nie nowotworowy)
Miejsce przerzutów
Nie dotyczy (normalna linia komórek śródbłonka naczyniówki siatkówki płodu)
Zastosowania
Badania nad angiogenezą oczną; unaczynienie siatkówki i naczyniówki; ocena terapii anty-VEGF (bewacyzumab, ranibizumab); modelowanie AMD i retinopatii cukrzycowej; testy tworzenia rurek; przepuszczalność naczyń; model śródbłonka siatkówki u naczelnych z rzędu NHP

02Klasyfikacja

Organizm
makak rezus
Seks
Nieokreślone
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Status GMO
Bez GMO
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Podobny do nabłonka
Typ komórki
Komórki śródbłonka
Czas podwojenia
ok. 24–36 godzin

04Identyfikatory

Źródło
RF/6A (numer katalogowy Cytion 305150)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Ekspresja i podatność

Ekspresja białek
Czynnik Ⅷ, fibronektyna

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (numer artykułu Cytion 820100a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS i 1% NEAA
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.
Współczynnik podziału
od 1 do 5
Gęstość wysiewu
od 1 do 2 × 10⁴ komórek/cm²
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia
Po rozmrożeniu należy wysiać komórki w gęstości 5 × 10⁴ komórek/cm² i odczekać co najmniej 24 godziny, aż komórki przylgną do podłoża, przed pierwszą wymianą pożywki. Nie należy dopuścić do osiągnięcia przez hodowle pełnej konfluencji, ponieważ hamowanie kontaktowe może osłabić fenotyp śródbłonka.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
Płód
Pochodzenie etniczne
Nie dotyczy (linia komórkowa naczelnych innych niż człowiek; Macaca mulatta)