Skip to content
RF/6A
Tissue
ชั้นคอรอยด์, จอประสาทตา
Disease
เยื่อบุผนังหลอดเลือดชั้นในของจอประสาทตาและชั้นคอรอยด์ปกติ (ของทารกในครรภ์; ไม่ก่อให้เกิดเนื้องอก)
Metastatic site
ไม่เกี่ยวข้อง (เซลล์เยื่อบุผิวชั้นในของจอประสาทตาและชั้นคอรอยด์ของทารกในครรภ์ชนิดปกติ)

Documents

RF/6A

Cell line · Product number 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
  • CoA
1

01General information

Description

RF/6A เป็นสายเซลล์เยื่อบุผนังหลอดเลือดชั้นกลางของจอตาจากลิงรีซัส (Macaca mulatta) ที่สร้างขึ้นจากเนื้อเยื่อชั้นกลางของจอตาและจอตาของทารกในครรภ์ สายเซลล์นี้เจริญเติบโตเป็นชั้นเดียวที่ติดกับพื้นผิว โดยมีรูปร่างคล้ายเซลล์เยื่อบุผิว เซลล์ RF/6A ยังคงรักษาลักษณะสำคัญของเซลล์เยื่อบุผิวไว้ รวมถึงการแสดงออกของ Factor VIII (von Willebrand factor), fibronectin และ Weibel-Palade granules ซึ่งสามารถตรวจพบได้ด้วยการส่องกล้องอิเล็กตรอน — โดยที่ Weibel-Palade granules ดังกล่าวช่วยยืนยันว่าเซลล์เหล่านี้เป็นเซลล์เยื่อบุผิว สายเซลล์นี้ถูกสร้างขึ้นเดิมเพื่อศึกษาการสร้างหลอดเลือดในจอตาและชั้นโครอยด์ และได้รับการนำไปใช้อย่างแพร่หลายเป็นแบบจำลองเซลล์เอนโดเทลของไพรเมตสำหรับการวิจัยการสร้างหลอดเลือดในตา

RF/6A สามารถนำไปใช้ในวิจัยการสร้างหลอดเลือดในตา การศึกษาการสร้างหลอดเลือดในจอตาและชั้นโครอยด์ การประเมินประสิทธิภาพของสารต้านการสร้างหลอดเลือด (สารยับยั้ง VEGF, bevacizumab, ranibizumab), การสร้างแบบจำลองโรคจอประสาทตาเสื่อมจากอายุ (AMD), ชีววิทยาของโรคจอประสาทตาจากเบาหวาน, และการประเมินความซึมผ่านของหลอดเลือดในสภาพแวดล้อมจุลภาคของตา เนื่องจากมีต้นกำเนิดจากสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมจำพวกไพรเมตที่ไม่ใช่มนุษย์ (NHP) ทำให้ RF/6A มีความใกล้เคียงกับชีววิทยาของหลอดเลือดจอตาของมนุษย์มากกว่าแบบจำลองเซลล์เยื่อบุหลอดเลือดของสัตว์ฟันแทะ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการศึกษาที่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองของไอโซฟอร์ม VEGF เฉพาะของไพรเมตและเภสัชวิทยาทางตา สายพันธุ์นี้มักถูกใช้ในการทดสอบการก่อตัวของหลอดเลือด การทดสอบการเคลื่อนที่ และการทดลองกระตุ้นด้วย VEGF

Tissue
ชั้นคอรอยด์, จอประสาทตา
Disease
เยื่อบุผนังหลอดเลือดชั้นในของจอประสาทตาและชั้นคอรอยด์ปกติ (ของทารกในครรภ์; ไม่ก่อให้เกิดเนื้องอก)
Metastatic site
ไม่เกี่ยวข้อง (เซลล์เยื่อบุผิวชั้นในของจอประสาทตาและชั้นคอรอยด์ของทารกในครรภ์ชนิดปกติ)
Applications
การวิจัยการสร้างหลอดเลือดใหม่ในตา; การสร้างหลอดเลือดในจอประสาทตาและชั้นคอรอยด์; การประเมินผลการรักษาด้วยยาต้าน VEGF (เบวาซิซูแมบ, รานิบูซิแมบ); การสร้างแบบจำลองโรคจอประสาทตาเสื่อมและโรคจอประสาทตาจากเบาหวาน; การทดสอบการสร้างท่อ; การซึมผ่านของหลอดเลือด; แบบจำลองเยื่อบุหลอดเลือดในจอประสาทตาของลิง NHP

02Classification

Organism
Rhesus macaque
Sex
Unspecified
Growth properties
Adherent
GMO status
Non-GMO
GMO status details
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
ลักษณะคล้ายเยื่อบุผิว
Cell type
เซลล์บุผนังหลอดเลือด
Doubling time
ประมาณ 24 ถึง 36 ชั่วโมง

04Identifiers

Citation
RF/6A (หมายเลขในแคตตาล็อก Cytion 305150)
NCBI TaxID
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Expression and susceptibility

Protein expression
แฟคเตอร์ Ⅷ, ไฟโบรเนกติน

06Handling and culture

Culture medium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamine, w: 2.2 g/L NaHCO3, w: EBSS (หมายเลขบทความ Cytion 820100a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10% และ NEAA 1%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Split ratio
1 ถึง 5
Seeding density
1 ถึง 2 × 10⁴ เซลล์/ตารางเซนติเมตร
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Post-thaw recovery
หลังจากละลายน้ำแข็งแล้ว ให้เพาะเลี้ยงเซลล์บนจานเพาะเลี้ยงที่ความหนาแน่น 5 × 10⁴ เซลล์ต่อตารางเซนติเมตร และปล่อยให้เซลล์ยึดเกาะอย่างน้อย 24 ชั่วโมงก่อนเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเซลล์ครั้งแรก ห้ามปล่อยให้เซลล์เจริญเติบโตจนเต็มจานเพาะเลี้ยง เนื่องจากภาวะยับยั้งการเจริญเติบโตจากการสัมผัส (contact inhibition) อาจทำให้เซลล์บุผนังหลอดเลือดแสดงลักษณะทางพันธุกรรมที่ลดลง
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Donor age
ทารกในครรภ์
Ethnicity
ไม่สามารถใช้ได้ (สายพันธุ์เซลล์ที่ไม่ใช่มนุษย์; Macaca mulatta)