Pereiti prie turinio
RF/6A
Audinys
Chorėja, tinklainė
Liga
Normalus tinklainės choroidinis endotelis (embrioninis; netumorogeninis)
Metastazių vieta
Netaikoma (įprasta vaisiaus tinklainės choroidinės endotelio ląstelių linija)

Dokumentai

RF/6A

Cell line · Prekės numeris 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Pritaikymas / Rekomendacijos

Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

RF/6A – tai rezus makakų (Macaca mulatta) tinklainės choroidinio endotelio ląstelių linija, išauginta iš vaisiaus choroidės ir tinklainės audinių. Linija auga kaip prisitvirtinęs monosluoksnis, turintis epitelio tipo morfologiją. RF/6A ląstelės išlaiko pagrindines endotelio savybes, įskaitant VIII faktoriaus (von Willebrando faktoriaus), fibronektino ir Weibel-Palade granulių, aptinkamų elektronine mikroskopija, ekspresiją – pastarosios patvirtina jų endotelio tapatybę. Ši linija iš pradžių buvo sukurta tinklainės ir choroidės kraujagyslių formavimosi tyrimams ir plačiai naudojama kaip primatų endotelio modelis akių angiogenezės tyrimams.

RF/6A linija tinka akių angiogenezės tyrimams, tinklainės ir gyslainės kraujagyslių susidarymo tyrimams, antiangiogeninių preparatų (VEGF inhibitorių, bevacizumabo, ranibizumabo) vertinimui, su amžiumi susijusios geltonosios dėmės degeneracijos (AMD) modeliavimui, diabetinės retinopatijos biologijai ir kraujagyslių pralaidumo akies mikroaplinkoje vertinimui. Kadangi RF/6A kilusi iš nežmoginių primatų (NHP), ji yra artimesnė žmogaus tinklainės kraujagyslių biologijai nei graužikų endotelio modeliai, ypač atliekant tyrimus, susijusius su primatams būdingomis VEGF izoformų reakcijomis ir akių farmakologija. Ši linija dažnai naudojama vamzdelių formavimo tyrimams, migracijos tyrimams ir VEGF stimuliacijos eksperimentams.

Audinys
Chorėja, tinklainė
Liga
Normalus tinklainės choroidinis endotelis (embrioninis; netumorogeninis)
Metastazių vieta
Netaikoma (įprasta vaisiaus tinklainės choroidinės endotelio ląstelių linija)
Paraiškos
Akių angiogenezės tyrimai; tinklainės ir gyslainės kraujagyslių susidarymas; anti-VEGF terapijos vertinimas (bevacizumabas, ranibizumabas); AMD ir diabetinės retinopatijos modeliavimas; vamzdelių formavimosi tyrimai; kraujagyslių pralaidumas; NHP primatų tinklainės endotelio modelis

02Klasifikacija

Organizmas
Rhesus makakas
Seksas
Nenurodyta
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
Be GMO
Išsami informacija apie GMO statusą
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašus
Ląstelių tipas
Endotelio ląstelės
Laikas, per kurį skaičius padvigubėja
maždaug nuo 24 iki 36 valandų

04Identifikatoriai

Nuoroda
RF/6A (Cytion katalogo numeris 305150)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Išraiška ir jautrumas

Baltojų baltymų ekspresija
Faktorius Ⅷ, fibronektinas

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutaminas, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion gaminio numeris 820100a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS ir 1 % NEAA
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Skaidymo santykis
1–5
Sėjos tankis
1–2 × 10⁴ ląstelių/cm²
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atkūrimas po atšilimo
Atšildžius, ląsteles pasėkite 5 × 10⁴ ląstelių/cm² tankumu ir prieš pirmąjį terpės keitimą palaukite mažiausiai 24 valandas, kol ląstelės prisitvirtins. Neleiskite, kad kultūros pasiektų visišką konfluenciją, nes kontaktinis slopinimas gali susilpninti endotelio fenotipą.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
Vaisius
Etninė priklausomybė
Netaikoma (nežmogiškųjų primatų ląstelių linija; Macaca mulatta)