İçeriğe atla
RF/6A
Doku
Koroid, retina
Hastalık
Normal retina koroid endoteli (fetal; tümör oluşturmayan)
Metastaz yeri
Uygulanamaz (normal fetal retina koroid endotel hücre hattı)

RF/6A

Cell line · Ürün numarası 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

RF/6A, fetal koroid ve retina dokusundan elde edilen bir rhesus makak (Macaca mulatta) retina koroid endotel hücre hattıdır. Bu hücre hattı, epitel benzeri morfolojiye sahip, yapışkan bir tek tabaka halinde büyür. RF/6A hücreleri, Faktör VIII (von Willebrand faktörü), fibronektin ve elektron mikroskobu ile saptanabilen Weibel-Palade granüllerinin ekspresyonu dahil olmak üzere temel endotel özelliklerini korur; özellikle Weibel-Palade granülleri, bu hücrelerin endotel kimliğini teyit eder. Bu hücre hattı, başlangıçta retina ve koroid vaskülarizasyonu çalışmaları için oluşturulmuş olup, oküler anjiyogenez araştırmaları için bir primat endotel modeli olarak yaygın bir şekilde benimsenmiştir.

RF/6A, oküler anjiyogenez araştırmalarında, retina ve koroid vaskülarizasyonu çalışmalarında, anti-anjiyojenik ajanların (VEGF inhibitörleri, bevacizumab, ranibizumab) değerlendirilmesinde, yaşa bağlı maküler dejenerasyon (AMD) modellemesi, diyabetik retinopati biyolojisi ve oküler mikroortamdaki vasküler geçirgenliğin değerlendirilmesi alanlarında kullanılabilir. İnsan dışı primat (NHP) kökenli olması, RF/6A'yı kemirgen endotel modellerine kıyasla insan retina vasküler biyolojisine daha yakın kılar; bu durum özellikle primatlara özgü VEGF izoform yanıtlarını ve oküler farmakolojiyi içeren çalışmalarda geçerlidir. Bu hücre hattı, tüp oluşumu testlerinde, göç testlerinde ve VEGF stimülasyon deneylerinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

Doku
Koroid, retina
Hastalık
Normal retina koroid endoteli (fetal; tümör oluşturmayan)
Metastaz yeri
Uygulanamaz (normal fetal retina koroid endotel hücre hattı)
Uygulamalar
Oküler anjiyogenez araştırmaları; retina ve koroid vaskülarizasyonu; anti-VEGF tedavisi değerlendirmesi (bevacizumab, ranibizumab); AMD ve diyabetik retinopati modellemesi; tüp oluşumu testleri; vasküler geçirgenlik; NHP primat retina endotel modeli

02Sınıflandırma

Canlı
Rhesus makak
Cinsiyet
Belirtilmemiş
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GDO'suz
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Epitel benzeri
Hücre türü
Endotel hücreleri
İki katına çıkma süresi
yaklaşık 24 ila 36 saat

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
RF/6A (Cytion katalog numarası 305150)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
Faktör Ⅷ, Fibronektin

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion makale numarası 820100a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ve %1 NEAA ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Bölünme oranı
1'den 5'e kadar
Ekim yoğunluğu
1 ila 2 × 10⁴ hücre/cm²
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözülme sonrası toparlanma
Çözüldükten sonra, hücreleri 5 × 10⁴ hücre/cm² yoğunluğunda plakalara ekleyin ve ilk besiyeri değişiminden önce hücrelerin yapışması için en az 24 saat bekleyin. Temas inhibisyonu endotel fenotipini azaltabileceğinden, kültürlerin tam konfluansa ulaşmasına izin vermeyin.
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Bağışçının yaşı
Fetüs
Etnik köken
Uygulanamaz (insan dışı primat hücre dizisi; Macaca mulatta)