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RF/6A
Tecido
Coroide, retina
Doença
Endotélio coróide retiniano normal (fetal; não tumorigénico)
Local da metástase
Não aplicável (linha celular endotelial coróide-retiniana fetal normal)

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RF/6A

Cell line · Número do produto 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00sem impostos nem portes de envio

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01Informações gerais

Descrição

A RF/6A é uma linha celular de endotélio coróide-retiniano de macaco rhesus (Macaca mulatta), estabelecida a partir de tecido fetal da coróide e da retina. A linha cresce como uma monocamada aderente com morfologia semelhante à epitelial. As células RF/6A mantêm características endoteliais fundamentais, incluindo a expressão do Fator VIII (fator de von Willebrand), da fibronectina e dos grânulos de Weibel-Palade, detetáveis por microscopia eletrónica — sendo que estes últimos confirmam a sua identidade endotelial. A linha foi originalmente estabelecida para estudos sobre a vascularização da retina e da coróide e tem sido amplamente adotada como modelo endotelial de primatas para a investigação da angiogénese ocular.

A RF/6A é aplicável na investigação da angiogénese ocular, em estudos sobre a vascularização da retina e da coróide, na avaliação de agentes antiangiogénicos (inibidores do VEGF, bevacizumab, ranibizumab), modelização da degeneração macular relacionada com a idade (DMRI), biologia da retinopatia diabética e avaliação da permeabilidade vascular no microambiente ocular. A origem em primatas não humanos (NHP) torna a RF/6A mais próxima da biologia vascular da retina humana do que os modelos endoteliais de roedores, particularmente para estudos que envolvam respostas a isoformas do VEGF específicas dos primatas e farmacologia ocular. Esta linhagem é frequentemente utilizada em ensaios de formação de tubos, ensaios de migração e experiências de estimulação com VEGF.

Tecido
Coroide, retina
Doença
Endotélio coróide retiniano normal (fetal; não tumorigénico)
Local da metástase
Não aplicável (linha celular endotelial coróide-retiniana fetal normal)
Aplicações
Investigação sobre a angiogénese ocular; vascularização da retina e da coróide; avaliação da terapia anti-VEGF (bevacizumab, ranibizumab); modelação da DMRI e da retinopatia diabética; ensaios de formação de tubos; permeabilidade vascular; modelo endotelial retiniano em primatas NHP

02Classificação

Organismo
Macaco rhesus
Sexo
Não especificado
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
Sem OGM
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Células endoteliais
Tempo de duplicação
aprox. 24 a 36 horas

04Identificadores

Referência
RF/6A (número de catálogo da Cytion 305150)
Número de identificação fiscal do NCBI
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
Fator Ⅷ, Fibronectina

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
EMEM (MEM Eagle), com: 2 mM L-Glutamina, com: 2,2 g/L NaHCO3, com: EBSS (número de artigo Cytion 820100a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS e 1% de NEAA
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Rácio de divisão
1 a 5
Densidade de sementeira
1 a 2 × 10⁴ células/cm²
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após a descongelação, semeie as células a uma densidade de 5 × 10⁴ células/cm² e aguarde pelo menos 24 horas para que adiram antes da primeira troca de meio. Não deixe que as culturas atinjam a confluência total, uma vez que a inibição por contacto pode reduzir o fenótipo endotelial.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
Feto
Etnia
Não aplicável (linha celular de primata não humano; Macaca mulatta)