Siirry sisältöön
RF/6A
Kudos
Suonikalvo, verkkokalvo
Sairaus
Normaali verkkokalvon suonikalvon endoteeli (sikiön; ei-kasvainta aiheuttava)
Metastaasikohde
Ei sovelleta (normaali sikiön verkkokalvon ja suonikalvon endoteelisolulinja)

Asiakirjat

RF/6A

Cell line · Tuotenumero 305150

RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...

€550.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

RF/6A on rhesusmakakista (Macaca mulatta) peräisin oleva verkkokalvon ja suonikalvon endoteelisolulinja, joka on perustettu sikiön suonikalvo- ja verkkokalvokudoksesta. Solulinja kasvaa kiinnittyvänä yksikerroksisena epiteelin kaltaisella morfologialla. RF/6A-soluilla on säilynyt keskeisiä endoteelisolujen ominaisuuksia, kuten tekijä VIII:n (von Willebrandin tekijä) ja fibronektiinin ilmentyminen sekä elektronimikroskoopilla havaittavat Weibel-Palade-rakeet – joista viimeksi mainitut vahvistavat solujen endoteeliluonteen. Solulinja perustettiin alun perin verkkokalvon ja suonikalvon verisuonittumisen tutkimusta varten, ja sitä on käytetty laajalti kädellisten endoteelimallina silmän angiogeneesitutkimuksessa.

RF/6A-solulinjaa voidaan käyttää silmän angiogeneesitutkimuksessa, verkkokalvon ja suonikalvon verisuonistumisen tutkimuksessa, antiangiogeenisten aineiden (VEGF-estäjät, bevasitsumabi, ranibitsumabi) arvioinnissa, ikään liittyvän makuladegeneraation (AMD) mallintamiseen, diabeettisen retinopatian biologiaan sekä verisuonten läpäisevyyden arviointiin silmän mikroympäristössä. Koska RF/6A on peräisin muista kuin ihmisapinoista (NHP), se vastaa paremmin ihmisen verkkokalvon verisuonibiologiaa kuin jyrsijöiden endoteelimallit, erityisesti tutkimuksissa, joissa tarkastellaan kädellisten lajikohtaisia VEGF-isoformien vasteita ja silmän farmakologiaa. Kantaa käytetään yleisesti putkenmuodostusmäärityksissä, migraatiomäärityksissä ja VEGF-stimulaatiokokeissa.

Kudos
Suonikalvo, verkkokalvo
Sairaus
Normaali verkkokalvon suonikalvon endoteeli (sikiön; ei-kasvainta aiheuttava)
Metastaasikohde
Ei sovelleta (normaali sikiön verkkokalvon ja suonikalvon endoteelisolulinja)
Sovellukset
Silmän angiogeneesin tutkimus; verkkokalvon ja suonikalvon verisuonitus; anti-VEGF-hoidon arviointi (bevasitsumabi, ranibitsumabi); ikärappeuman (AMD) ja diabeettisen retinopatian mallintaminen; putkenmuodostustestit; verisuonten läpäisevyys; NHP-kädellisten verkkokalvon endoteelimalli

02Luokittelu

Organismi
Rhesusmakaki
Sukupuoli
Määrittelemätön
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-vapaa
GMO-statuksen tiedot
No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Solutyyppi
Endoteelisolut
Kaksinkertaistumisaika
noin 24–36 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
RF/6A (Cytion-tuotenumero 305150)
NCBI-verotunnus
9544
Cellosaurus
CVCL_4552

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
Tekijä Ⅷ, fibronektiini

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Jakosuhde
1–5
Kylvötiheys
1–2 × 10⁴ solua/cm²
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulatuksen jälkeen solut siirretään viljelyastioihin tiheydellä 5 × 10⁴ solua/cm² ja annetaan niiden kiinnittyä vähintään 24 tuntia ennen ensimmäistä elatusaineen vaihtoa. Viljelmien ei tule antaa saavuttaa täyttä konfluenssia, sillä kontaktinestovaikutus voi heikentää endoteelifenotyyppiä.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
Sikiö
Etnisyys
Ei sovelleta (muiden kuin ihmisten kädellisten solulinja; Macaca mulatta)