
- Kudos
- Suonikalvo, verkkokalvo
- Sairaus
- Normaali verkkokalvon suonikalvon endoteeli (sikiön; ei-kasvainta aiheuttava)
- Metastaasikohde
- Ei sovelleta (normaali sikiön verkkokalvon ja suonikalvon endoteelisolulinja)
Asiakirjat
RF/6A
Cell line · Tuotenumero 305150
RF/6A is a rhesus macaque (Macaca mulatta) retinal choroidal endothelial cell line established from fetal choroid and retina tissue. The line is grows as ...
Räätälöinti / Suositukset
- RF/6ACell line€550.00
01Yleistä tietoa
- Kuvaus
RF/6A on rhesusmakakista (Macaca mulatta) peräisin oleva verkkokalvon ja suonikalvon endoteelisolulinja, joka on perustettu sikiön suonikalvo- ja verkkokalvokudoksesta. Solulinja kasvaa kiinnittyvänä yksikerroksisena epiteelin kaltaisella morfologialla. RF/6A-soluilla on säilynyt keskeisiä endoteelisolujen ominaisuuksia, kuten tekijä VIII:n (von Willebrandin tekijä) ja fibronektiinin ilmentyminen sekä elektronimikroskoopilla havaittavat Weibel-Palade-rakeet – joista viimeksi mainitut vahvistavat solujen endoteeliluonteen. Solulinja perustettiin alun perin verkkokalvon ja suonikalvon verisuonittumisen tutkimusta varten, ja sitä on käytetty laajalti kädellisten endoteelimallina silmän angiogeneesitutkimuksessa.
RF/6A-solulinjaa voidaan käyttää silmän angiogeneesitutkimuksessa, verkkokalvon ja suonikalvon verisuonistumisen tutkimuksessa, antiangiogeenisten aineiden (VEGF-estäjät, bevasitsumabi, ranibitsumabi) arvioinnissa, ikään liittyvän makuladegeneraation (AMD) mallintamiseen, diabeettisen retinopatian biologiaan sekä verisuonten läpäisevyyden arviointiin silmän mikroympäristössä. Koska RF/6A on peräisin muista kuin ihmisapinoista (NHP), se vastaa paremmin ihmisen verkkokalvon verisuonibiologiaa kuin jyrsijöiden endoteelimallit, erityisesti tutkimuksissa, joissa tarkastellaan kädellisten lajikohtaisia VEGF-isoformien vasteita ja silmän farmakologiaa. Kantaa käytetään yleisesti putkenmuodostusmäärityksissä, migraatiomäärityksissä ja VEGF-stimulaatiokokeissa.
- Kudos
- Suonikalvo, verkkokalvo
- Sairaus
- Normaali verkkokalvon suonikalvon endoteeli (sikiön; ei-kasvainta aiheuttava)
- Metastaasikohde
- Ei sovelleta (normaali sikiön verkkokalvon ja suonikalvon endoteelisolulinja)
- Sovellukset
- Silmän angiogeneesin tutkimus; verkkokalvon ja suonikalvon verisuonitus; anti-VEGF-hoidon arviointi (bevasitsumabi, ranibitsumabi); ikärappeuman (AMD) ja diabeettisen retinopatian mallintaminen; putkenmuodostustestit; verisuonten läpäisevyys; NHP-kädellisten verkkokalvon endoteelimalli
02Luokittelu
- Organismi
- Rhesusmakaki
- Sukupuoli
- Määrittelemätön
- Kasvuominaisuudet
- Kiinnittynyt
- GMO-status
- GMO-vapaa
- GMO-statuksen tiedot
- No genetic modification; wildtype rhesus macaque fetal retinal choroidal endothelial cell line
- Bioturvallisuustaso
- 1
03Ominaisuudet
- Morfologia
- Epiteelin kaltainen
- Solutyyppi
- Endoteelisolut
- Kaksinkertaistumisaika
- noin 24–36 tuntia
04Tunnisteet
- Lähdeviite
- RF/6A (Cytion-tuotenumero 305150)
- NCBI-verotunnus
- 9544
- Cellosaurus
- CVCL_4552
05Ilmentyminen ja alttius
- Proteiinin ilmentyminen
- Tekijä Ⅷ, fibronektiini
06Käsittely ja viljely
- Viljelyalusta
- EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
- Inkubaatioilma
37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.
- Ravintolisät
- Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
- Dissosiaatioreagenssi
- Accutase
- Soluviljely
- Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
- Jakosuhde
- 1–5
- Kylvötiheys
- 1–2 × 10⁴ solua/cm²
- Nesteen uusiminen
- 2-3 kertaa viikossa
- Sulamisen jälkeinen palautuminen
- Sulatuksen jälkeen solut siirretään viljelyastioihin tiheydellä 5 × 10⁴ solua/cm² ja annetaan niiden kiinnittyä vähintään 24 tuntia ennen ensimmäistä elatusaineen vaihtoa. Viljelmien ei tule antaa saavuttaa täyttä konfluenssia, sillä kontaktinestovaikutus voi heikentää endoteelifenotyyppiä.
- Sulatus ja viljely
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Laadunvalvonta ja kryosäilytys
- Hedelmättömyys
Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.
Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.
- Jäädytysaine
- Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
- Säilytysolosuhteet
Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.
- Toimitusehdot
Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.
08Lahjoittaja
- Luovuttajan ikä
- Sikiö
- Etnisyys
- Ei sovelleta (muiden kuin ihmisten kädellisten solulinja; Macaca mulatta)
09Oikeudelliset ja turvallisuusasiat
- Turvallisuusohjeet
- Kun suunnitellaan kryoputken säilyttämistä nestemäisessä typessä sulatusta varten, on noudatettava tiukkoja turvatoimenpiteitä. Asianmukaiset suojakäsineet ja -vaatteet ovat välttämättömiä, ja kasvonaamarin tai suojalasien käyttö on välttämätöntä siirrettäessä jäädytettyjä näytteitä nestetyppisäiliöön tai siitä pois. Tällä pyritään pienentämään loukkaantumisriskiä, joka aiheutuu kryoputkien mahdollisista räjähdyksistä, jotka voivat aiheuttaa terävien sirpaleiden sinkoutumisen.
- Takuu
Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia
Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa
- Aineiden siirtoa koskeva sopimus vaaditaan
- Kyllä