AB2.2

La linea cellulare AB2.2 è una linea cellulare embrionale staminale (ES) murina ampiamente utilizzata, derivata dal ceppo murino 129S7 (noto anche come 129P2/OlaHsd). Ha svolto un ruolo di primo piano nel gene targeting e nella generazione di topi transgenici grazie alla sua robusta capacità di espansione in vitro e di manipolazione genetica. Le cellule AB2.2 sono pluripotenti, in grado di contribuire a tutti gli strati germinali e sono state fondamentali per la produzione di chimere compatibili con la linea germinale. Tuttavia, come molte linee di cellule ES mantenute per lunghi periodi di coltura, AB2.2 è incline all'instabilità cromosomica, soprattutto all'aneuploidia che coinvolge il cromosoma 8.

L'analisi citogenetica di AB2.2 e delle sue sotto-linee ha rivelato un'elevata frequenza di anomalie cromosomiche, con una trisomia 8 pura e a mosaico particolarmente comune. In uno studio, AB2.2 ha mostrato un cariotipo a mosaico che comprendeva guadagni dei cromosomi 8 e Y, incluse configurazioni come 42,XY,+Y,+8 / 41,XY,+Y / 40,XY. Tra le sue sotto-linee sono state identificate ulteriori anomalie cariotipiche, come doppie trisomie che coinvolgono i cromosomi 8 e 11 e cromosomi derivati complessi derivanti da traslocazioni sbilanciate che coinvolgono il cromosoma 8. Queste aberrazioni strutturali e numeriche sono state identificate come un'aberrazione di tipo strutturale e numerico. Queste aberrazioni strutturali e numeriche sono associate a una minore efficienza di trasmissione germinale e la loro presenza complica l'interpretazione delle relazioni genotipo-fenotipo negli animali chimerici.

Dato il suo background genetico e la suscettibilità all'instabilità cromosomica, AB2.2 rimane un potente strumento nella genetica dei topi, ma richiede un attento controllo di qualità. Prima di procedere all'iniezione di blastocisti, si raccomanda di eseguire uno screening del cariotipo di routine, comprendente sia il G-banding che la FISH, per garantire l'integrità cromosomica necessaria per una trasmissione germinale affidabile e analisi fenotipiche accurate.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia