AB2.2

A linha de células AB2.2 é uma linha de células estaminais embrionárias (ES) murinas amplamente utilizada, derivada da estirpe de ratinhos 129S7 (também conhecida como 129P2/OlaHsd). Desempenhou um papel proeminente na seleção de genes e na geração de ratinhos transgénicos devido à sua capacidade robusta de expansão in vitro e de manipulação genética. As células AB2.2 são pluripotentes, capazes de contribuir para todas as camadas germinativas, e têm sido fundamentais para a produção de quimeras germinativas competentes. No entanto, tal como muitas linhas de células ES mantidas durante longos períodos de cultura, as células AB2.2 são propensas à instabilidade cromossómica, especialmente à aneuploidia envolvendo o cromossoma 8.

A análise citogenética da linhagem AB2.2 e das suas sub-linhagens revelou uma elevada frequência de anomalias cromossómicas, sendo a trissomia 8 pura e em mosaico particularmente comum. Num estudo, a AB2.2 apresentou um cariótipo em mosaico envolvendo ganhos dos cromossomas 8 e Y, incluindo configurações como 42,XY,+Y,+8 / 41,XY,+Y / 40,XY. Entre as suas sub-linhagens, foram identificadas anomalias cariotípicas adicionais, tais como trissomias duplas envolvendo os cromossomas 8 e 11, e cromossomas derivados complexos resultantes de translocações desequilibradas envolvendo o cromossoma 8. Estas aberrações estruturais e numéricas estão associadas a uma menor eficiência de transmissão na linha germinal e a sua presença complica a interpretação das relações genótipo-fenótipo em animais quiméricos.

Dado o seu contexto genético e a sua suscetibilidade à instabilidade cromossómica, o AB2.2 continua a ser uma ferramenta poderosa na genética do rato, mas requer um controlo de qualidade cuidadoso. Recomenda-se a realização de um rastreio cariotípico de rotina - incluindo a análise de bandas G e a FISH - antes de proceder à injeção de blastocistos, a fim de garantir a integridade cromossómica necessária para uma transmissão fiável da linha germinal e análises fenotípicas precisas.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia