Pāriet uz saturu
BNL CL.2
Audums
Aknas
Sinonīmi
BNL-CL.2, BNL CL2, BNL.CL2, BN-CL2, BNCL-2, BNCL2

Dokumenti

BNL CL.2

Cell line · Preces numurs 305177

BNL CL.2, a mouse liver cell line originally derived from BALB/c embryonic liver cells, plays a significant role in the study of cellular biology and mole...

€550.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

BNL CL.2 - peļu aknu šūnu līnija, kas sākotnēji iegūta no BALB/c embrionālajām aknu šūnām - ir nozīmīga šūnu bioloģijas un molekulāro mehānismu pētniecībā, jo īpaši attiecībā uz šūnu ciklu un tā regulēšanu. Pētnieki ir plaši izmantojuši BNL CL.2, lai raksturotu ciklīnneatkarīgās kināzes (CDK) proteīnu kompleksus un pētītu šo kompleksu izmaiņas gan pēc ķīmiskas, gan vīrusu transformācijas. Šī līnija kalpo kā priekštece dažādām transformētām šūnu līnijām, piemēram, BNL 1ME A.7R.1, BNL 1NG A.2 un BNL SV A.8, kuras visas ir radušās no BNL CL.2 un ir izrādījušās būtiskas CDK izmaiņu pētīšanai pēc transformācijas.

BNL CL.2 izceļas ar to, ka, testējot ar imunosupresētām pelēm, tā nav tumorogēna, un tā nespēj augt neatkarīgi no enkura, lai gan tai piemīt spēja veidot kolonijas puscietos barotnēs. Tas padara to par nenovērtējamu modeli šūnu procesu un transformāciju izpētei kontrolētā vidē. Turpretī tās atvasinātās līnijas, piemēram, tās, kas transformētas ar 3-metilholantrēna epoksīdu, MNNG un SV40, demonstrē spēju augt mīkstā agārā un veidot audzējus imūndeficītām pelēm, uzsverot ģenētisko un vides izmaiņu ietekmi uz šūnu uzvedību. BNL CL.2 šūnu līnija un tās atvasinājumi turpina nodrošināt stabilu pamatu šūnu transformācijas, stabilas šūnu transfekcijas un saistīto šūnu un molekulārās bioloģijas jomu pētījumiem.

Audums
Aknas
Sinonīmi
  • BNL-CL.2
  • BNL CL2
  • BNL.CL2
  • BN-CL2
  • BNCL-2
  • BNCL2

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija
Tumorogēns
Nē, imunosupresētām pelēm šūnas nebija audzējamas, bet veidoja kolonijas pusšķidrā barotnē.

04Identifikatori

Atsauce
BNL CL.2 (Cytion kataloga numurs 305177)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_4383

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Šķirne / pasuga
BALB/c
Donora vecums
Embrijs