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BNL CL.2
Tessuto
Fegato
Sinonimi
BNL-CL.2, BNL CL2, BNL.CL2, BN-CL2, BNCL-2, BNCL2

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BNL CL.2

Cell line · Codice prodotto 305177

BNL CL.2, a mouse liver cell line originally derived from BALB/c embryonic liver cells, plays a significant role in the study of cellular biology and mole...

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01Informazioni generali

Descrizione

BNL CL.2, una linea cellulare epatica di topo originariamente derivata da cellule epatiche embrionali di BALB/c, svolge un ruolo significativo nello studio della biologia cellulare e dei meccanismi molecolari, soprattutto per quanto riguarda il ciclo cellulare e la sua regolazione. I ricercatori hanno utilizzato ampiamente la BNL CL.2 per caratterizzare i complessi proteici della chinasi ciclina-dipendente (CDK) e studiare le alterazioni di questi complessi in seguito a trasformazioni chimiche e virali. Questa linea funge da progenitore per diverse linee cellulari trasformate, come BNL 1ME A.7R.1, BNL 1NG A.2 e BNL SV A.8, tutte originate da BNL CL.2 e che si sono dimostrate essenziali per lo studio delle alterazioni delle CDK dopo la trasformazione.

BNL CL.2 si distingue per la sua natura non tumorigenica quando viene testato in topi immunosoppressi e per la sua incapacità di crescere in modo indipendente dall'ancoraggio, pur avendo la capacità di formare colonie in terreni semisolidi. Ciò la rende un modello prezioso per esplorare i processi e le trasformazioni cellulari in un ambiente controllato. Al contrario, le linee derivate, come quelle trasformate da 3-metilcolantrene epossido, MNNG e SV40, dimostrano la capacità di crescere in agar morbido e di formare tumori in topi immunodeficienti, evidenziando l'impatto delle alterazioni genetiche e ambientali sul comportamento cellulare. La linea cellulare BNL CL.2 e i suoi derivati continuano a fornire una solida base per la ricerca sulla trasformazione cellulare, la trasfezione cellulare stabile e i campi correlati della biologia cellulare e molecolare.

Tessuto
Fegato
Sinonimi
  • BNL-CL.2
  • BNL CL2
  • BNL.CL2
  • BN-CL2
  • BNCL-2
  • BNCL2

02Classificazione

Organismo
Mouse
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale
Tumorigenico
No, le cellule non sono risultate tumorigeniche nei topi immunosoppressi, ma hanno formato colonie in terreno semisolido.

04Identificatori

Riferimento bibliografico
BNL CL.2 (numero di catalogo Cytion 305177)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_4383

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Razza / sottospecie
BALB/c
Età dei donatori
Embrione