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BNL CL.2
Tecido
Fígado
Sinónimos
BNL-CL.2, BNL CL2, BNL.CL2, BN-CL2, BNCL-2, BNCL2

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BNL CL.2

Cell line · Número do produto 305177

BNL CL.2, a mouse liver cell line originally derived from BALB/c embryonic liver cells, plays a significant role in the study of cellular biology and mole...

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01Informações gerais

Descrição

A BNL CL.2, uma linha de células hepáticas de ratinho originalmente derivada de células hepáticas embrionárias BALB/c, desempenha um papel significativo no estudo da biologia celular e dos mecanismos moleculares, especialmente no que diz respeito ao ciclo celular e à sua regulação. Os investigadores têm utilizado extensivamente a BNL CL.2 para caraterizar os complexos proteicos da quinase dependente da ciclina (CDK) e investigar as alterações nestes complexos após transformação química e viral. Esta linha serve de progenitora para várias linhas celulares transformadas, tais como a BNL 1ME A.7R.1, a BNL 1NG A.2 e a BNL SV A.8, todas elas originárias da BNL CL.2 e que se revelaram essenciais para o estudo das alterações das CDK após a transformação.

A BNL CL.2 distingue-se pela sua natureza não-tumorigénica quando testada em ratinhos imunossuprimidos e pela sua incapacidade de crescer independentemente da ancoragem, embora possua a capacidade de formar colónias em meios semi-sólidos. Isto torna-a um modelo inestimável para explorar processos e transformações celulares num ambiente controlado. Em contrapartida, as suas linhas derivadas, tais como as transformadas pelo epóxido de 3-metilcolantreno, MNNG e SV40, demonstram a capacidade de crescer em ágar mole e formar tumores em ratinhos imunodeficientes, realçando o impacto das alterações genéticas e ambientais no comportamento celular. A linha celular BNL CL.2 e os seus derivados continuam a fornecer uma base sólida para a investigação em transformação celular, transfecção estável de células e domínios afins da biologia celular e molecular.

Tecido
Fígado
Sinónimos
  • BNL-CL.2
  • BNL CL2
  • BNL.CL2
  • BN-CL2
  • BNCL-2
  • BNCL2

02Classificação

Organismo
Rato
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Epitelial
Tumorigénico
Não, as células não eram tumorigénicas em ratinhos imunossuprimidos, mas formavam colónias em meio semissólido.

04Identificadores

Referência
BNL CL.2 (número de catálogo da Cytion 305177)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_4383

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Raça / subespécie
BALB/c
Idade do dador
Embrião