Przejdź do treści
C8166
Chusteczka
Krew pępowinowa
Synonimy
C8166-CD4

Dokumenty

C8166

Cell line · Numer produktu 305528

The C8166 cell line is a T-cell line transformed by Human T-cell Leukemia Virus type 1 (HTLV-1) and is widely utilized in research on retroviral infection...

€550.00bez podatku i kosztów wysyłki
W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

Linia komórkowa C8166 to linia komórek T transformowana przez wirusa białaczki komórek T człowieka typu 1 (HTLV-1), szeroko wykorzystywana w badaniach nad zakażeniami retrowirusowymi, zwłaszcza HIV i HTLV. Komórki C8166, uzyskane początkowo poprzez fuzję limfocytów z krwi pępowinowej z komórkami T pochodzącymi od pacjentów z białaczką lub chłoniakiem, zachowują genom HTLV-1 i ulegają ekspresji wirusowego RNA, nie wytwarzając jednak zakaźnych cząstek HTLV-1. Linia ta wyróżnia się wysoką podatnością na zakażenie wirusem HIV-1, czego dowodem jest tworzenie syncytii – dużych, wielojądrowych komórek powstających w wyniku aktywności fuzji wirusowej, co czyni ją solidnym modelem do badań nad patogenezą HIV i efektami cytopatycznymi in vitro.

Komórki C8166 są szeroko wykorzystywane w badaniach dotyczących funkcji i interakcji genów wirusowych, takich jak białko wirusowe R (Vpr) wirusa HIV-1, które może indukować zatrzymanie cyklu komórkowego w fazie G2/M oraz apoptozę w zakażonych komórkach T. Wykazano, że wprowadzenie białka Vpr do komórek C8166 aktywuje szlaki apoptyczne związane z kaspazami, co wskazuje na jego potencjał jako celu w badaniach nad apoptozą związaną z HIV oraz w terapiach przeciwwirusowych. Ponadto ekspresja przez komórki C8166 określonych markerów powierzchniowych oraz ich wrażliwość na wnikanie i replikację wirusa HIV-1 sprawiają, że są one cenne w ocenie wpływu inhibitorów na replikację HIV i reakcje komórkowe w różnych warunkach, w tym w pożywkach bezsurowicowych, które, jak wykazano, zmieniają poziomy ekspresji niektórych receptorów i z czasem zmniejszają zakaźność wirusa HIV.

Zdolność adaptacyjna tej linii komórkowej oraz jej wrażliwość na HIV i HTLV-1 stanowią dynamiczny system do badań w dziedzinie wirusologii i immunologii, w szczególności w celu zrozumienia latencji wirusowej, mechanizmów replikacji oraz potencjalnych interwencji terapeutycznych ukierunkowanych na infekcje wirusowe w komórkach T.

Chusteczka
Krew pępowinowa
Synonimy
  • C8166-CD4

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Mężczyzna
Właściwości związane ze wzrostem
Zawieszenie
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
2

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Podobne do limfoblastów
Typ komórki
Limfoblastoid

04Identyfikatory

Źródło
C8166 (numer katalogowy Cytion 305528)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1099

05Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS
Hodowla komórek w subkulturze
Zebrać komórki zawiesiny do probówki o pojemności 15 ml i delikatnie przemyć przylegające komórki PBS pozbawionym wapnia i magnezu (użyć 3-5 ml dla kolb T25 i 5-10 ml dla kolb T75). Nałożyć Accutase (1-2 ml na kolby T25, 2,5 ml na kolby T75), zapewniając pełne pokrycie warstwy komórek. Pozostawić komórki do inkubacji w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Po inkubacji połączyć i odwirować zarówno zawiesinę, jak i przylegające komórki. Po odwirowaniu ostrożnie zawiesić osad komórek i przenieść zawiesinę komórek do nowych kolb zawierających świeżą pożywkę.
Gęstość wysiewu
2–4 × 10⁵ komórek/ml
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

07Darczyńca

Wiek dawcy
Noworodek
Pochodzenie etniczne
Kaukaski