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C8166
Gewebe
Nabelschnurblut
Synonyme
C8166-CD4

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C8166

Cell line · Artikelnummer 305528

The C8166 cell line is a T-cell line transformed by Human T-cell Leukemia Virus type 1 (HTLV-1) and is widely utilized in research on retroviral infection...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die Zelllinie C8166 ist eine durch das humane T-Zell-Leukämievirus Typ 1 (HTLV-1) transformierte T-Zell-Linie und wird häufig in der Forschung zu retroviralen Infektionen, insbesondere HIV und HTLV, eingesetzt. Ursprünglich durch Fusion von Lymphozyten aus Nabelschnurblut mit T-Zellen von Leukämie- und Lymphompatienten gewonnen, behalten C8166-Zellen das HTLV-1-Genom bei und exprimieren virale RNA, ohne infektiöse HTLV-1-Partikel zu produzieren. Diese Zelllinie zeichnet sich durch ihre hohe Anfälligkeit für eine HIV-1-Infektion aus, was sich in der Bildung von Synzytien zeigt – großen, mehrkernigen Zellen, die durch die virale Fusionsaktivität entstehen –, was sie zu einem robusten Modell für Untersuchungen zur HIV-Pathogenese und zu zytopathischen Effekten in vitro macht.

C8166-Zellen wurden in großem Umfang in Studien zur Untersuchung viraler Genfunktionen und -interaktionen eingesetzt, beispielsweise im Zusammenhang mit dem HIV-1-Virusprotein R (Vpr), das in infizierten T-Zellen einen G2/M-Zellzyklusstillstand und Apoptose induzieren kann. Es wurde gezeigt, dass die Einführung von Vpr in C8166-Zellen kaspase-vermittelte Apoptosewege aktiviert, was auf sein Potenzial als Zielmolekül in Studien zur HIV-bedingten Apoptose und in antiviralen Therapien hindeutet. Darüber hinaus machen die Expression spezifischer Oberflächenmarker durch C8166 sowie die Empfindlichkeit gegenüber dem Eindringen und der Replikation von HIV-1 diese Zelllinie wertvoll für die Bewertung der Auswirkungen von Inhibitoren auf die HIV-Replikation und zelluläre Reaktionen unter verschiedenen Bedingungen, einschließlich serumfreier Medien, von denen gezeigt wurde, dass sie die Expressionsniveaus bestimmter Rezeptoren verändern und die HIV-Infektiosität im Laufe der Zeit verringern.

Die Anpassungsfähigkeit und Empfindlichkeit dieser Zelllinie gegenüber HIV und HTLV-1 bieten ein dynamisches System für die Forschung in der Virologie und Immunologie, insbesondere zum Verständnis der viralen Latenz, der Replikationsmechanismen und potenzieller therapeutischer Interventionen gegen Virusinfektionen in T-Zellen.

Gewebe
Nabelschnurblut
Synonyme
  • C8166-CD4

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Aussetzung
Biologische Sicherheitsstufe
2

03Merkmale

Morphologie
Lymphoblasten-ähnlich
Zelltyp
Lymphoblastoid

04Bezeichner

Quellenangabe
C8166 (Cytion-Katalognummer 305528)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1099

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Subkultivierung
Die Suspensionszellen in einem 15-ml-Röhrchen sammeln und die anhaftenden Zellen vorsichtig mit PBS ohne Kalzium und Magnesium waschen (3-5 ml für T25-Kolben und 5-10 ml für T75-Kolben verwenden). Accutase auftragen (1-2 ml für T25-Kolben, 2,5 ml für T75-Kolben), um sicherzustellen, dass die Zellschicht vollständig bedeckt ist. Die Zellen 10 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubieren lassen. Nach der Inkubation sowohl die Suspension als auch die adhärenten Zellen mischen und zentrifugieren. Nach der Zentrifugation das Zellpellet vorsichtig resuspendieren und die Zellsuspension in neue Flaschen mit frischem Medium überführen.
Aussaatdichte
2–4 × 10⁵ Zellen/ml
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
Neugeborene
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch