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Células ME-180
Tecido
Útero, colo do útero
Doença
Carcinoma epidermoide
Local da metástase
Omento
Sinónimos
Me-180, ME 180, ME180

Documentos

Células ME-180

Cell line · Número do produto 300196

A linha celular ME-180 é uma linha celular epitelial estabelecida a partir de um carcinoma de células escamosas altamente invasivo, originalmente isolado de uma metástase no omento...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular ME-180 é uma linha celular epitelial estabelecida a partir de um carcinoma de células escamosas altamente invasivo, originalmente isolado da metástase omental de um carcinoma cervical numa doente branca de 66 anos. O carcinoma era caracterizado por aglomerados celulares irregulares sem queratinização significativa e com necrose mínima. Esta linha celular é particularmente importante para a investigação do cancro, especialmente em estudos que envolvam o cancro do colo do útero e outras formas de carcinoma de células escamosas, devido à sua origem e natureza agressiva. As células ME-180 são tumorigénicas e demonstraram formar carcinomas epidermóides bem diferenciados quando implantadas em ratinhos nus.

As células ME-180 têm várias propriedades únicas, incluindo um cariótipo heteroplóide com um modo subtriplóide, indicando uma disposição cromossómica instável. As células apresentam uma morfologia epitelial típica com numerosos desmossomas e tonofibrilas, e não apresentam inibição de contacto, levando frequentemente a um crescimento em camadas em cultura. O crescimento da linha celular é inibido pelo fator de necrose tumoral alfa (TNF alfa), o que a torna útil para estudos que investigam os efeitos das citocinas inflamatórias nas células tumorais. Além disso, as células ME-180 contêm ADN do papilomavírus humano (HPV), com uma maior homologia com o HPV-68 em comparação com o HPV-18, o que pode ser relevante para estudos sobre a carcinogénese relacionada com o HPV.

As células ME-180 são também valiosas na investigação de doenças infecciosas devido à sua sensibilidade a vários vírus. A linha celular tem sido utilizada para estudar a interação com vários vírus, incluindo os vírus da gripe e os mixovírus. As células ME-180 demonstraram a capacidade de formar infecções persistentes com alguns mixovírus, o que as torna um modelo útil para estudar a latência viral e os efeitos a longo prazo da infeção viral nas células cancerígenas. A combinação da sua origem cancerígena, suscetibilidade viral e caraterísticas específicas de crescimento fazem da ME-180 uma ferramenta versátil na investigação oncológica e virológica.

Tecido
Útero, colo do útero
Doença
Carcinoma epidermoide
Local da metástase
Omento
Sinónimos
  • Me-180
  • ME 180
  • ME180

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
2

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Epitelial

04Identificadores

Referência
ME-180 (número de catálogo Cytion 300196)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1401

05Expressão e suscetibilidade

Vírus
HPV68 positivo

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
McCoys 5a, com: 3,0 g/L de glucose, com: glutamina estável, com: 2,0 mM de piruvato de sódio, com: 2,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820200a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
66 anos
Etnia
Caucasiano