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SK-GT-4
Tecido
Esófago distal
Doença
adenocarcinoma
Sinónimos
SKGT4, SK4

Documentos

SK-GT-4

Cell line · Número do produto 305454

The SK-GT-4 cell line is a human esophageal adenocarcinoma model derived from primary adenocarcinoma arising in dysplastic Barrett's metaplasia of the dis...

€375.00sem impostos nem portes de envio

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1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular SK-GT-4 é um modelo de adenocarcinoma esofágico humano derivado de um adenocarcinoma primário que surgiu na metaplasia de Barrett displásica do esófago distal. Esta linha celular faz parte da série SK-GT criada no Memorial Sloan-Kettering Cancer Center e tem sido fundamental no estudo da progressão do esófago de Barrett para o adenocarcinoma esofágico. As células SK-GT-4 apresentam características epiteliais e constituem uma ferramenta valiosa para a investigação dos mecanismos moleculares do cancro do esófago, em particular aqueles que envolvem mutações no gene supressor de tumores p53.

Estudos genómicos da SK-GT-4 identificaram uma mutação no gene TP53, especificamente uma transição de G para A no códon 175 do exão 5, resultando numa substituição de arginina por histidina. Esta mutação tem sido associada à quimiorresistência a agentes que causam danos no ADN, tais como o 5-fluorouracilo, a mitomicina C e a cisplatina. Estudos indicam que o estado mutacional do p53 tem um impacto significativo na resposta celular à quimioterapia, influenciando a regulação do ciclo celular e a apoptose nas células SK-GT-4. Estas características tornam esta linha celular um modelo fundamental para explorar estratégias terapêuticas direcionadas para vias associadas ao p53.

A SK-GT-4 tem sido utilizada para avaliar o potencial de invasão tumoral e a resposta a fatores de crescimento no adenocarcinoma esofágico. Esta linha celular demonstrou capacidades invasivas em ensaios da câmara de Boyden, destacando a sua relevância para o estudo da metástase. A SK-GT-4 também expressa transcritos de vários fatores de crescimento, incluindo o TGF-β e o fator de crescimento derivado de plaquetas, que contribuem para o seu fenótipo agressivo. O papel consolidado desta linha celular na investigação translacional sublinha a sua utilidade tanto na biologia básica do cancro como no desenvolvimento de fármacos.

Tecido
Esófago distal
Doença
adenocarcinoma
Sinónimos
  • SKGT4
  • SK4

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
2

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Célula epitelial
Tempo de duplicação
30-35 horas

04Identificadores

Referência
SK-GT-4 (número de catálogo da Cytion 305454)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2195

05Expressão e suscetibilidade

Perfil mutacional
Mutação: KRAS, simples, p.Gly12Ala (c.35G>C), heterozigótica; Mutação: PIK3CA, simples, p.Glu542Lys (c.1624G>A), heterozigótica; Mutação: TP53, simples, p.Gln100Ter (c.298C>T), homozigótica
Vírus
EBV -, HBV -, HCV -, VIH-1 -, VIH-2 -, HPV -, HTLV-I/-II -, MLV -

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,1 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
2-4*10⁴/cm²
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
89 anos
Etnia
Caucasiano