İçeriğe atla
L-WRN
Doku
Bağ dokusu

L-WRN

Cell line · Ürün numarası 300641

L-WRN hücre hattı, başlangıçta bağ dokusundan izole edilen fare fibroblastları olan L hücrelerinden türetilmiş bir fare fibroblast hücre hattıdır. L-W...

€550.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

L-WRN hücre hattı, orijinal olarak bağ dokusundan izole edilen fare fibroblastları olan L hücrelerinden türetilen bir murin fibroblast hücre hattıdır. L-WRN hücreleri Wnt3a, R-spondin 3 ve Noggin'i kararlı bir şekilde ifade edecek şekilde tasarlanmıştır. Bu faktörler bağırsak organoidlerinin ve kök hücre kültürlerinin büyümesi ve bakımı için kritik öneme sahiptir. Bu proteinlerin aşırı ekspresyonu, bağırsak kök hücrelerinin çoğalmasını ve farklılaşmasını artırarak L-WRN hücrelerini bağırsak biyolojisi ve hastalık modellemesini incelemek için değerli bir araç haline getirir.

Organoid kültüründeki uygulamalarına ek olarak, L-WRN hücreleri Wnt sinyal yolaklarını araştırmak için sağlam bir model olarak hizmet eder. Wnt sinyalizasyonu, gelişim sırasında ve yetişkin dokularda hücre kaderini, çoğalmasını ve göçünü düzenlemede çok önemlidir. Tutarlı ve kontrollü bir Wnt3a, R-spondin 3 ve Noggin kaynağı sağlayarak, L-WRN hücreleri bu süreçlerin altında yatan moleküler mekanizmaların araştırılmasını kolaylaştırır. Araştırmacılar bu hücreleri kanser, doku rejenerasyonu ve gelişim biyolojisi dahil olmak üzere çeşitli biyolojik bağlamlarda bu sinyal moleküllerinin rollerini incelemek için kullanabilirler.

Genel olarak, L-WRN hücre hattı, karmaşık üç boyutlu kültürlerin büyümesini destekleme kabiliyeti ve temel sinyal yollarını incelemedeki faydası nedeniyle biyomedikal araştırmalarda güçlü bir araçtır. Bağırsak kök hücre araştırmalarının ilerlemesindeki rolü ve Wnt sinyalizasyonunu anlamamıza yaptığı katkılar, hücresel ve moleküler biyoloji alanındaki önemini vurgulamaktadır.

Doku
Bağ dokusu
Uygulamalar
3D hücre kültürü

02Sınıflandırma

Canlı
Fare
Cinsiyet
Erkek
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This murine NIH-3T3-derived cell line (L-WRN) contains expression constructs for Wnt3a, R-spondin-3, and Noggin, including SV40 DNA sequences and dual antibiotic markers (hph and Tn5-neo), enabling secretion of these signaling molecules. The inserts are stably present in NIH-3T3-based cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Fibroblast

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
L-WRN (Cytion katalog numarası 300641)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
10090
Cellosaurus
CVCL_DA06

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
Wnt-3A, R-spondin, noggin

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM, w: 4,5 g/L Glukoz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Sodyum piruvat (Cytion ürün numarası 820300a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Tür / alt tür
C3H/An
Bağışçının yaşı
100 gün