Ga naar de inhoud
L-WRN
Weefsel
Bindweefsel

Documenten

L-WRN

Cell line · Productnummer 300641

De L-WRN-cellijn is een fibroblastcellijn van de muis die is afgeleid van de L-cellen, fibroblasten van de muis die oorspronkelijk uit bindweefsel zijn geïsoleerd. L-W...

€550.00excl. btw en verzendkosten
Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De L-WRN cellijn is een muriene fibroblast cellijn afgeleid van de L-cellen, die oorspronkelijk geïsoleerd zijn uit bindweefsel. L-WRN cellen zijn ontwikkeld om stabiel Wnt3a, R-spondine 3 en Noggin tot expressie te brengen. Deze factoren zijn cruciaal voor de groei en het onderhoud van darmorganoïden en stamcelculturen. De overexpressie van deze eiwitten verbetert de proliferatie en differentiatie van darmstamcellen, waardoor L-WRN cellen een waardevol hulpmiddel zijn voor het bestuderen van darmbiologie en het modelleren van ziekten.

Naast hun toepassing in organoïde kweek, dienen L-WRN cellen als een robuust model voor het onderzoeken van Wnt signaalroutes. Wnt-signalering is cruciaal bij het reguleren van het lot, de proliferatie en migratie van cellen tijdens de ontwikkeling en in volwassen weefsels. Door een consistente en gecontroleerde bron van Wnt3a, R-spondine 3 en Noggin te bieden, vergemakkelijken L-WRN cellen het onderzoek naar de moleculaire mechanismen die aan deze processen ten grondslag liggen. Onderzoekers kunnen deze cellen gebruiken om de rol van deze signaalmoleculen in verschillende biologische contexten te ontleden, waaronder kanker, weefselregeneratie en ontwikkelingsbiologie.

In het algemeen is de L-WRN cellijn een krachtig hulpmiddel in biomedisch onderzoek vanwege zijn vermogen om de groei van complexe driedimensionale culturen te ondersteunen en zijn nut bij het bestuderen van belangrijke signaalroutes. Haar rol in de vooruitgang van darmstamcelonderzoek en haar bijdragen aan ons begrip van Wnt-signalering benadrukken haar belang op het gebied van cellulaire en moleculaire biologie.

Weefsel
Bindweefsel
Toepassingen
3D-celcultuur

02Classificatie

Organisme
Muis
Seks
Man
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This murine NIH-3T3-derived cell line (L-WRN) contains expression constructs for Wnt3a, R-spondin-3, and Noggin, including SV40 DNA sequences and dual antibiotic markers (hph and Tn5-neo), enabling secretion of these signaling molecules. The inserts are stably present in NIH-3T3-based cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Fibroblast

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
L-WRN (Cytion catalogusnummer 300641)
NCBI-belastingnummer
10090
Cellosaurus
CVCL_DA06

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
Wnt-3A, R-spondine, noggin

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Soort / ondersoort
C3H/An
Leeftijd van de donor
100 dagen