Siirry sisältöön
L-WRN
Kudos
Sidekudos

Asiakirjat

L-WRN

Cell line · Tuotenumero 300641

L-WRN-solulinja on hiiren fibroblastisolulinja, joka on peräisin L-soluista, jotka ovat alun perin sidekudoksesta eristettyjä hiiren fibroblasteja. L-W...

€550.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

L-WRN-solulinja on hiiren fibroblastisolulinja, joka on peräisin L-soluista, jotka ovat hiiren fibroblasteja, jotka on alun perin eristetty sidekudoksesta. L-WRN-solut on muunnettu ilmentämään vakaasti Wnt3a:ta, R-spondiini 3:a ja Nogginia. Nämä tekijät ovat kriittisiä suoliston organoidien ja kantasoluviljelmien kasvulle ja ylläpidolle. Näiden proteiinien yliekspressio lisää suoliston kantasolujen lisääntymistä ja erilaistumista, mikä tekee L-WRN-soluista arvokkaan välineen suoliston biologian tutkimiseen ja sairauksien mallintamiseen.

Sen lisäksi, että L-WRN-soluja käytetään organoidiviljelyssä, ne ovat vankka malli Wnt-signalointireittien tutkimiseen. Wnt-signalointi on keskeistä solujen kohtalon, proliferaation ja migraation säätelyssä kehityksen aikana ja aikuiskudoksissa. Tarjoamalla johdonmukaisen ja kontrolloidun lähteen Wnt3a:lle, R-spondiini 3:lle ja Nogginille L-WRN-solut helpottavat näiden prosessien taustalla olevien molekyylimekanismien tutkimusta. Tutkijat voivat käyttää näitä soluja analysoidakseen näiden signaalimolekyylien roolia erilaisissa biologisissa yhteyksissä, kuten syövässä, kudosten uudistumisessa ja kehitysbiologiassa.

Kaiken kaikkiaan L-WRN-solulinja on tehokas väline biolääketieteellisessä tutkimuksessa, koska se kykenee tukemaan monimutkaisten kolmiulotteisten viljelmien kasvua ja on hyödyllinen keskeisten signaalireittien tutkimisessa. Sen rooli suoliston kantasolututkimuksen edistämisessä ja sen panos Wnt-signaloinnin ymmärtämisessä korostavat sen merkitystä solu- ja molekyylibiologian alalla.

Kudos
Sidekudos
Sovellukset
3D-soluviljely

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This murine NIH-3T3-derived cell line (L-WRN) contains expression constructs for Wnt3a, R-spondin-3, and Noggin, including SV40 DNA sequences and dual antibiotic markers (hph and Tn5-neo), enabling secretion of these signaling molecules. The inserts are stably present in NIH-3T3-based cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Fibroblastit

04Tunnisteet

Lähdeviite
L-WRN (Cytionin luettelonumero 300641)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_DA06

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
Wnt-3A, R-spondiini, noggiini

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Rotua / alalajia
C3H/An
Luovuttajan ikä
100 päivää