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L-WRN

Cell line · Artikelnummer 300641

Die L-WRN-Zelllinie ist eine murine Fibroblasten-Zelllinie, die aus den L-Zellen gewonnen wurde, bei denen es sich um Mausfibroblasten handelt, die ursprünglich aus Bindegewebe isoliert wurden. L-W...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die L-WRN-Zelllinie ist eine murine Fibroblasten-Zelllinie, die von den L-Zellen abgeleitet ist, bei denen es sich um Mausfibroblasten handelt, die ursprünglich aus Bindegewebe isoliert wurden. Die L-WRN-Zellen wurden so manipuliert, dass sie Wnt3a, R-Spondin 3 und Noggin stabil exprimieren. Diese Faktoren sind entscheidend für das Wachstum und die Aufrechterhaltung von Darmorganoiden und Stammzellkulturen. Die Überexpression dieser Proteine fördert die Vermehrung und Differenzierung von Darmstammzellen und macht L-WRN-Zellen zu einem wertvollen Instrument für die Untersuchung der Darmbiologie und die Modellierung von Krankheiten.

Zusätzlich zu ihrer Anwendung in der Organoidkultur dienen L-WRN-Zellen als robustes Modell zur Untersuchung von Wnt-Signalwegen. Die Wnt-Signalübertragung spielt eine zentrale Rolle bei der Regulierung des Zellschicksals, der Zellproliferation und der Zellmigration während der Entwicklung und in erwachsenen Geweben. Durch die Bereitstellung einer konsistenten und kontrollierten Quelle von Wnt3a, R-Spondin 3 und Noggin erleichtern L-WRN-Zellen die Erforschung der diesen Prozessen zugrunde liegenden molekularen Mechanismen. Forscher können diese Zellen nutzen, um die Rolle dieser Signalmoleküle in verschiedenen biologischen Zusammenhängen zu untersuchen, darunter Krebs, Geweberegeneration und Entwicklungsbiologie.

Insgesamt ist die L-WRN-Zelllinie ein leistungsfähiges Instrument für die biomedizinische Forschung, da sie das Wachstum komplexer dreidimensionaler Kulturen unterstützt und sich für die Untersuchung wichtiger Signalwege eignet. Ihre Rolle bei der Weiterentwicklung der Darmstammzellforschung und ihre Beiträge zum Verständnis der Wnt-Signalübertragung unterstreichen ihre Bedeutung auf dem Gebiet der Zell- und Molekularbiologie.

Gewebe
Bindegewebe
Anwendungen
3D-Zellkultur

02Klassifizierung

Organismus
Maus
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This murine NIH-3T3-derived cell line (L-WRN) contains expression constructs for Wnt3a, R-spondin-3, and Noggin, including SV40 DNA sequences and dual antibiotic markers (hph and Tn5-neo), enabling secretion of these signaling molecules. The inserts are stably present in NIH-3T3-based cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblasten

04Bezeichner

Quellenangabe
L-WRN (Cytion-Katalognummer 300641)
NCBI-Steuer-ID
10090
Cellosaurus
CVCL_DA06

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
Wnt-3A, R-Spondin, Noggin

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
C3H/An
Alter des Spenders
100 Tage