İçeriğe atla
Doku
Böbrek, kortikal toplayıcı kanal
Eş anlamlılar
M1-CCD

M-1

Cell line · Ürün numarası 305261

€550.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

M-1 hücre hattı, transgenik yetişkin bir farenin böbreğinden türetilen iyi karakterize edilmiş bir epitel modelidir. Özellikle, M-1 hücreleri kortikal toplayıcı kanal epitelinden kaynaklanır ve bu nefron segmentinin birçok farklılaşmış özelliğini korur. Bu hücreler, epitelyal sodyum kanalları (ENaC), aquaporinler ve sıkı bağlantı proteinleri dahil olmak üzere kortikal toplayıcı kanal hücrelerinin tipik belirteçlerini ifade ederek onları böbrek fizyolojisi, iyon taşınması ve epitelyal polarite çalışmaları için yaygın olarak kullanılan bir in vitro model haline getirir.

İşlevsel olarak M-1 hücreleri, aldosteronla düzenlenen sodyum geri emilimini ve vazopressin aracılı su taşınımını incelemek için kritik olan yüksek transepitelyal direnç ve vektörel iyon taşıma özellikleri sergiler. Stoos ve arkadaşları tarafından yapılan temel karakterizasyona göre, M-1 hücreleri geçirgen destekler üzerinde polarize tek tabakalar oluşturur ve taşıma proteini ekspresyonunu ve aktivitesini düzenleyen deksametazon ve aldosteron gibi hormonal uyaranlara uygun yanıt verir. Bu özellikler M-1 hücrelerini böbrek epitel hücrelerinde elektrolit taşıma ve hücresel sinyal mekanizmalarının incelenmesinde özellikle değerli kılmaktadır.

Dahası, M-1 hücreleri, fare hücre hatları için STR profili kullanılarak genetik kimlik doğrulaması da dahil olmak üzere daha yeni çalışmalarda doğrulanmıştır. Bu da onların çağdaş böbrek fizyolojisi araştırmalarındaki süregelen öneminin ve güvenilirliğinin altını çizmektedir. Kontrollü koşullar altında in vivo benzeri davranışları tekrarlayabilme yetenekleri, epitelyal fonksiyon, nefrotoksisite ve böbrek hastalığı modelleme çalışmalarında standart olmalarını sağlamıştır.

Doku
Böbrek, kortikal toplayıcı kanal
Eş anlamlılar
  • M1-CCD

02Sınıflandırma

Canlı
Fare
Cinsiyet
Belirtilmemiş
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This murine collecting duct cell line (M-1) contains the early region of SV40 from a transgenic mouse line (Tg(SV40E)Bri7), supporting stable immortalization. The construct is endogenously integrated in the transgenic background. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Epitelyal

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
M-1 (Cytion katalog numarası 305261)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
10090
Cellosaurus
CVCL_8786

05İfade ve duyarlılık

Virüsler
Simian virüsü 40 (SV40)

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 g/L Glukoz, w: 2.5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0.5 mM Sodyum piruvat, w: 1.2 g/L NaHCO3 (Cytion makale numarası 820400a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %5 FBS, 5 µM deksametazon ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Tür / alt tür
Tg(SV40E)Bri/7 transgenik
Bağışçının yaşı
Belirtilmemiş