Pāriet uz saturu
Audums
Nieres, kores savācējvads
Sinonīmi
M1-CCD

Dokumenti

M-1

Cell line · Preces numurs 305261

€550.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

M-1 šūnu līnija ir labi raksturots epitēlija modelis, kas iegūts no transgēnas pieaugušas peles nieres. Konkrēti, M-1 šūnas nāk no kortikālā savācējkanāla epitēlija un saglabā daudzas šī nefrona segmenta diferencētas pazīmes. Šīs šūnas ekspresē marķierus, kas raksturīgi garo savācējkanālu šūnām, tostarp epitēlija nātrija kanālus (ENaC), akvaporīnus un ciešo savienojumu proteīnus, tāpēc tās ir plaši izmantots in vitro modelis nieru fizioloģijas, jonu transporta un epitēlija polaritātes pētījumiem.

Funkcionāli M-1 šūnām piemīt augsta transepitelija pretestība un vektoriālas jonu transporta īpašības, kas ir ļoti svarīgas, pētot aldosterona regulētu nātrija reabsorbciju un vazopresīna mediētu ūdens transportu. Saskaņā ar Stoos et al. veikto fundamentālo raksturojumu M-1 šūnas veido polarizētus monoslāņus uz caurlaidīgiem balstiem un uzrāda atbilstošu reakciju uz hormonāliem stimuliem, piemēram, deksametazonu un aldosteronu, kas regulē transporta proteīnu ekspresiju un aktivitāti. Šīs īpašības padara M-1 šūnas īpaši vērtīgas elektrolītu apstrādes un šūnu signalizācijas mehānismu izpētei nieru epitēlija šūnās.

Turklāt M-1 šūnas ir apstiprinātas jaunākajos pētījumos, tostarp ģenētiskajā autentificēšanā, izmantojot STR profilēšanu peļu šūnu līnijām. Tas uzsver to pastāvīgo nozīmi un uzticamību mūsdienu nieru fizioloģijas pētījumos. To spēja kontrolētos apstākļos atdarināt in vivo līdzīgu uzvedību ir noteikusi tās kā standartu epitēlija funkcijas, nefrotoksicitātes un nieru slimību modelēšanas pētījumos.

Audums
Nieres, kores savācējvads
Sinonīmi
  • M1-CCD

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Sekss
Nav norādīts
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This murine collecting duct cell line (M-1) contains the early region of SV40 from a transgenic mouse line (Tg(SV40E)Bri7), supporting stable immortalization. The construct is endogenously integrated in the transgenic background. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija

04Identifikatori

Atsauce
M-1 (Cytion kataloga numurs 305261)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_8786

05Pazīmes un uzņēmība

Vīrusi
Simian vīruss 40 (SV40)

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 5% FBS, 5 µM deksametazona
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Šķirne / pasuga
Tg(SV40E)Bri/7 transgēnu
Donora vecums
Nav norādīts