Siirry sisältöön
Kudos
Munuainen, kortikaalinen keräyskanava
Synonyymit
M1-CCD

Asiakirjat

M-1

Cell line · Tuotenumero 305261

€550.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

M-1-solulinja on hyvin karakterisoitu epiteelimalli, joka on peräisin siirtogeenisen aikuisen hiiren munuaisesta. M-1-solut ovat peräisin kortikaalisen keräyskanavan epiteelistä, ja ne säilyttävät monia tämän nefronisegmentin erilaistuneita piirteitä. Nämä solut ilmentävät kortikaalisen keräyskanavan soluille tyypillisiä merkkiaineita, kuten epiteelin natriumkanavia (ENaC), akvaporiineja ja tiukkoja liitosproteiineja, mikä tekee niistä laajalti käytetyn in vitro -mallin munuaisten fysiologian, ionien kuljettamisen ja epiteelin polariteetin tutkimiseen.

Toiminnallisesti M-1-soluilla on korkea transsepiteliaalinen resistanssi ja vektoriaaliset ioninkuljetusominaisuudet, jotka ovat kriittisiä tutkittaessa aldosteronin säätelemää natriumin takaisinimeytymistä ja vasopressiinivälitteistä vedenkuljetusta. Stoosin ym. perustavanlaatuisen luonnehdinnan mukaan M-1-solut muodostavat polarisoituneita monokerroksia läpäisevillä alustoilla ja reagoivat asianmukaisesti hormonaalisiin ärsykkeisiin, kuten deksametasoniin ja aldosteroniin, jotka säätelevät kuljetusproteiinien ilmentymistä ja aktiivisuutta. Nämä ominaisuudet tekevät M-1-soluista erityisen arvokkaita tutkittaessa elektrolyyttien käsittelymekanismeja ja solusignaalien välittämistä munuaisten epiteelisoluissa.

Lisäksi M-1-solut on validoitu uudemmissa tutkimuksissa, mukaan lukien geneettinen todentaminen hiirisolulinjojen STR-profiloinnin avulla. Tämä korostaa niiden jatkuvaa merkitystä ja luotettavuutta nykyaikaisessa munuaisten fysiologisessa tutkimuksessa. Niiden kyky toistaa in vivo-käyttäytymistä kontrolloiduissa olosuhteissa on vakiinnuttanut niiden aseman standardina epiteelin toimintaa, nefrotoksisuutta ja munuaistautien mallintamista koskevissa tutkimuksissa.

Kudos
Munuainen, kortikaalinen keräyskanava
Synonyymit
  • M1-CCD

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Sukupuoli
Määrittelemätön
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This murine collecting duct cell line (M-1) contains the early region of SV40 from a transgenic mouse line (Tg(SV40E)Bri7), supporting stable immortalization. The construct is endogenously integrated in the transgenic background. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteeli

04Tunnisteet

Lähdeviite
M-1 (Cytionin luettelonumero 305261)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_8786

05Ilmentyminen ja alttius

Virukset
Simian virus 40 (SV40)

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukoosia, w: 2,5 mM L-glutamiinia, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natriumpyruvaattia, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820400a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 5 %:lla FBS:ää, 5 µM deksametasonia
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Rotua / alalajia
Tg(SV40E)Bri/7 siirtogeeninen
Luovuttajan ikä
Määrittelemätön