Preskoči na vsebino
Tkivo
Ledvica, kortikalni zbirni kanal
Sinonimi
M1-CCD

Dokumenti

M-1

Cell line · Številka izdelka 305261

€550.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija M-1 je dobro opisan epitelijski model, pridobljen iz ledvic transgene odrasle miši. Celice M-1 izvirajo iz kortikalnega epitela zbiralnega kanala in ohranjajo številne diferencirane značilnosti tega segmenta nefrona. Te celice izražajo označevalce, značilne za celice kortikalnega zbiralnega kanala, vključno z epitelijskimi natrijevimi kanali (ENaC), akvaporini in proteini tesnega spoja, zato so pogosto uporabljen in vitro model za fiziologijo ledvic, prenos ionov in študije polarnosti epitelija.

Funkcionalno imajo celice M-1 visok transepitelijski upor in vektorske lastnosti prenosa ionov, ki so ključnega pomena za preučevanje z aldosteronom uravnavane reabsorpcije natrija in vazopresinom posredovanega prenosa vode. V skladu s temeljno karakterizacijo, ki so jo opravili Stoos in drugi, tvorijo celice M-1 polarizirane monosloje na prepustnih nosilcih in kažejo ustrezno odzivnost na hormonske dražljaje, kot sta deksametazon in aldosteron, ki uravnavata izražanje in aktivnost transportnih beljakovin. Zaradi teh lastnosti so celice M-1 še posebej dragocene pri raziskovanju mehanizmov ravnanja z elektroliti in celične signalizacije v epitelijskih celicah ledvic.

Poleg tega so bile celice M-1 potrjene v novejših študijah, vključno z genetsko avtentikacijo z uporabo STR profiliranja za mišje celične linije. To poudarja njihov nadaljnji pomen in zanesljivost v sodobnih raziskavah fiziologije ledvic. Njihova zmožnost, da v nadzorovanih pogojih ponovijo vedenje, podobno vedenju in vivo, jih je uveljavila kot standard v študijah delovanja epitelija, nefrotoksičnosti in modeliranja ledvičnih bolezni.

Tkivo
Ledvica, kortikalni zbirni kanal
Sinonimi
  • M1-CCD

02Razvrstitev

Organizem
Miška
Seks
Ni navedeno
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GSO
GMO-S1: This murine collecting duct cell line (M-1) contains the early region of SV40 from a transgenic mouse line (Tg(SV40E)Bri7), supporting stable immortalization. The construct is endogenously integrated in the transgenic background. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelijski

04Identifikatorji

Navajanje vira
M-1 (Cytionova kataloška številka 305261)
Davčna identifikacijska številka NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_8786

05Izražanje in dovzetnost

Virusi
Simijanski virus 40 (SV40)

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukoze, w: 2,5 mM L-glutamina, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natrijevega piruvata, w: 1,2 g/L NaHCO3 (številka izdelka Cytion 820400a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite s 5 % FBS, 5 µM deksametazona
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Pasma / podvrsta
Tg(SV40E)Bri/7 transgeni
Starost darovalca
Neopredeljeno