Tartalomra ugrás
Szövet
Vese, kérgi gyűjtőcsatorna
Szinonimák
M1-CCD

Dokumentumok

M-1

Cell line · Termékszám 305261

€550.00adó és szállítási költség nélkül
Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

Az M-1 sejtvonal egy jól jellemzett epitélmodell, amely egy transzgenikus felnőtt egér veséjéből származik. Az M-1 sejtek a kéregállomány gyűjtőcsatorna epitéliumából származnak, és megtartják ennek a nefronszegmensnek számos differenciált jellemzőjét. Ezek a sejtek a kérgi gyűjtőjárat sejtjeire jellemző markereket expresszálják, beleértve az epiteliális nátriumcsatornákat (ENaC), aquaporinokat és a tight junction fehérjéket, így széles körben használt in vitro modellé váltak a vese fiziológiájának, az iontranszportnak és az epiteliális polaritás vizsgálatára.

Funkcionálisan az M-1 sejtek magas transzepithelialis rezisztenciát és vektoriális iontranszport tulajdonságokat mutatnak, amelyek kritikusak az aldoszteron által szabályozott nátrium reabszorpció és a vazopresszin által közvetített víztranszport tanulmányozásához. Stoos és munkatársai alapozó jellemzése szerint az M-1 sejtek áteresztő hordozókon polarizált monoréteget képeznek, és megfelelő érzékenységet mutatnak a transzportfehérjék expresszióját és aktivitását szabályozó hormonális ingerekre, például a dexametazonra és az aldoszteronra. Ezek a tulajdonságok az M-1 sejteket különösen értékessé teszik a vese epitélsejtek elektrolitkezelési és sejtes jelátviteli mechanizmusainak feltárásában.

Ezenkívül az M-1 sejteket újabb vizsgálatokban validálták, beleértve az egérsejtvonalak STR-profilozással történő genetikai hitelesítését. Ez aláhúzza folyamatos jelentőségüket és megbízhatóságukat a kortárs vesefiziológiai kutatásokban. Az in vivo-szerű viselkedés kontrollált körülmények között történő reprodukálására való képességük standardnak számít az epithelfunkció, a nefrotoxicitás és a vesebetegségek modellezésének vizsgálatában.

Szövet
Vese, kérgi gyűjtőcsatorna
Szinonimák
  • M1-CCD

02Osztályozás

Organizmus
Egér
Szex
Nem meghatározott
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-S1
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
GMO-S1: This murine collecting duct cell line (M-1) contains the early region of SV40 from a transgenic mouse line (Tg(SV40E)Bri7), supporting stable immortalization. The construct is endogenously integrated in the transgenic background. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelialis

04Azonosítók

Hivatkozás
M-1 (Cytion katalógusszám: 305261)
NCBI adóazonosító szám
10090
Cellosaurus
CVCL_8786

05Kifejeződés és fogékonyság

Vírusok
Simian virus 40 (SV40)

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükóz, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nátrium-piruvát, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion 820400a cikkszám)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt 5% FBS-szel, 5 µM dexametazon-nal egészítsük ki
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Faj / alfaj
Tg(SV40E)Bri/7 transzgenikus
Az adományozó életkora
Meghatározatlan