Toledo

La línea celular Toledo es una línea celular de linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) que se estableció originalmente a partir de la sangre periférica de un paciente con DLBCL quien, posteriormente, desarrolló un linfoma secundario en el cerebro tras recibir quimioterapia de alta dosis y un trasplante de médula ósea. Esta línea celular presenta un cariotipo complejo con múltiples aberraciones cromosómicas, pero no presenta las translocaciones típicas asociadas con el linfoma de Burkitt.

Una de las características únicas de la línea celular Toledo es su falta de expresión de la cadena polipeptídica de inmunoglobulina (Ig), y tampoco presenta segmentos genéticos detectables de la región constante (C). A pesar de ello, Toledo conserva la capacidad de sufrir hipermutación somática en sus segmentos de genes variables (V), un fenómeno que se observa típicamente en las células B de los centros germinales. Curiosamente, Toledo acumula mutaciones intraclonales con mayor frecuencia que otras líneas celulares de linfoma, como Daudi y Raji, a pesar de la ausencia de mutaciones clonales significativas. Esto sugiere que el proceso de mutación pudo haber continuado in vitro después de la transformación, lo que podría ofrecer un modelo valioso para estudiar los mecanismos moleculares de la hipermutación somática.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.