Toledo

A linhagem celular Toledo é uma linhagem de linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) que foi originalmente estabelecida a partir do sangue periférico de um paciente com DLBCL que, posteriormente, desenvolveu um linfoma secundário no cérebro após quimioterapia de alta dose e transplante de medula óssea. Essa linha celular apresenta um cariótipo complexo com múltiplas aberrações cromossômicas, mas não possui as translocações típicas associadas ao linfoma de Burkitt.

Uma das características únicas da linhagem celular Toledo é a ausência de expressão da cadeia polipeptídica de imunoglobulina (Ig), além de não apresentar segmentos genéticos detectáveis da região constante (C). Apesar disso, a Toledo mantém a capacidade de sofrer hipermutação somática em seus segmentos de genes variáveis (V), um fenômeno tipicamente observado em células B do centro germinativo. Curiosamente, a Toledo acumula mutações intraclonais com uma frequência maior do que outras linhagens celulares de linfoma, como Daudi e Raji, apesar da ausência de mutações clonais significativas. Isso sugere que o processo de mutação pode ter continuado in vitro após a transformação, oferecendo potencialmente um modelo valioso para o estudo dos mecanismos moleculares da hipermutação somática.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.