Toledo

A linha celular Toledo é uma linha celular de linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) que foi originalmente isolada a partir do sangue periférico de um doente com DLBCL, que posteriormente desenvolveu um linfoma secundário no cérebro na sequência de quimioterapia de alta dose e transplante de medula óssea. Esta linha celular apresenta um cariótipo complexo com múltiplas aberrações cromossómicas, mas não possui as translocações típicas associadas ao linfoma de Burkitt.

Uma das características únicas da linha celular Toledo é a ausência de expressão da cadeia polipeptídica da imunoglobulina (Ig), além de não apresentar segmentos genéticos detetáveis da região constante (C). Apesar disso, a Toledo mantém a capacidade de sofrer hipermutação somática nos seus segmentos do gene variável (V), um fenómeno tipicamente observado nas células B do centro germinativo. Curiosamente, a Toledo acumula mutações intraclonais com uma frequência superior à de outras linhas celulares de linfoma, como a Daudi e a Raji, apesar da ausência de mutações clonais significativas. Isto sugere que o processo de mutação pode ter continuado in vitro após a transformação, oferecendo potencialmente um modelo valioso para o estudo dos mecanismos moleculares da hipermutação somática.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia