Toledo
Cell line · Product number 305351
The Toledo cell line is a diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) cell line that was originally established from the peripheral blood of a patient with DLBC...
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01General information
- Description
托萊多（Toledo）細胞系是一種彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）細胞系，最初是從一名DLBCL患者的外周血中建立的；該患者在接受高劑量化療和骨髓移植後，後來在腦部發展出繼發性淋巴瘤。 該細胞系呈現複雜的核型，具有多重染色體異常，但不具備伯基特淋巴瘤特有的轉位。
托萊多細胞系的一項獨特特徵是其缺乏免疫球蛋白（Ig）多肽鏈的表達，且也缺乏可檢測到的恆定（C）區基因片段。 儘管如此，Toledo 仍保留了在其可變（V）基因片段中發生體細胞超突變的能力，這是一種通常在生發中心 B 細胞中觀察到的現象。 耐人尋味的是，儘管托萊多細胞系缺乏顯著的克隆突變，其累積克隆內突變的頻率卻高於 Daudi 和 Raji 等其他淋巴瘤細胞系。這表明突變過程可能在體外轉化後持續進行，這可能為研究體細胞超突變的分子機制提供了一個有價值的模型。
- Tissue
- 外周血
- Disease
- 散發性大B細胞淋巴瘤（生發中心型）
- Applications
- 三維細胞培養、免疫學
- Synonyms
- TOLEDO
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Suspension
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 淋巴母細胞
- Doubling time
- 50 小時
04Identifiers
- Citation
- 托萊多（Cytion 型號 305351）
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_3611
05Expression and susceptibility
- Antigen expression
- CD10+、CD19+、CD20+、CD38+、CD23-、CD39-
- Mutational profile
- 突變：KRAS，簡單型，p.Gly13Asp (c.38G>A)，雜合子；突變：TP53，簡單型，p.Glu198fs (c.592_596del5)，未指定
- Viruses
- EBV 陰性、HBV 陰性、HCV 陰性、HIV-1 陰性、HIV-2 陰性、HTLV-1/2 陰性、MLV 陰性、SMRV 陰性
06Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640，含 2.0 mM 穩定谷氨醯胺，含 2.0 g/L NaHCO₃（Cytion 產品編號 820700a）
- Incubation atmosphere
37°C，5% CO₂，加濕環境。
- Supplements
- 在培養基中加入 10% 的胎牛血清（FBS）
- Dissociation reagent
- 無
- Subculturing
- 透過定期添加或更換培養基來維持培養。以 5 × 10⁵ 細胞/毫升的密度啟動培養，並將細胞濃度維持在 3 × 10⁵ 至 1 × 10⁶ 細胞/毫升的範圍內，以達到最佳生長效果。
- Seeding density
- 2 至 4 × 10⁵ 個細胞/毫升
- Fluid renewal
- 每 2 至 3 天
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。
為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。
- Freeze medium
- 作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
- Storage conditions
若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。
- Shipping conditions
冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
08Donor
- Donor age
- 成人
- Ethnicity
- 高加索人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 若計劃將低溫試管存放在液態氮中以供日後解凍，必須嚴格遵守相關安全措施。 必須穿戴適當的防護手套和防護服，且在將冷凍樣本移入或移出液氮罐時，必須佩戴口罩或安全護目鏡。此舉旨在降低因取出時冷凍試管可能發生爆炸而導致受傷的風險，此類爆炸可能造成尖銳碎片飛濺。
- Warranty
在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。
詳情請參閱我們的 《保固聲明》。
- Material Transfer Agreement required
- Yes