imWilms1

La lignée cellulaire Wilms1 a été initialement dérivée d’une tumeur de Wilms primaire, prélevée chez un patient chez qui on avait diagnostiqué de grosses tumeurs rénales bilatérales, une présentation caractéristique de la tumeur de Wilms (néphroblastome). Cette lignée cellulaire porte une mutation non-sens homozygote dans le gène WT1 (c.149 C>A, p.S50X), ce qui entraîne la production d’une protéine WT1 tronquée et non fonctionnelle. Le gène WT1 joue un rôle essentiel dans le développement rénal, et sa mutation est étroitement associée à la pathogenèse de la tumeur de Wilms, en particulier dans les tumeurs présentant une différenciation stromale. Les cellules Wilms1 présentent un caryotype stable sans anomalies chromosomiques significatives, et elles se caractérisent par un phénotype mésenchymateux, exprimant la vimentine tout en étant dépourvues de marqueurs épithéliaux tels que la cytokératine. Cette lignée présente une capacité limitée mais significative de différenciation mésenchymateuse, y compris le potentiel de se différencier en cellules de type musculaire dans des conditions spécifiques, ce qui en fait un modèle crucial pour l’étude des conséquences moléculaires des mutations du gène WT1.

Afin de pallier la durée de vie limitée des cellules Wilms1 primaires, la lignée cellulaire imWilms1 a été établie en introduisant un triple mutant de l’antigène T majeur du SV40 (U19dl89-97tsA58) dans les cellules tumorales d’origine, ce qui a facilité leur immortalisation. Cette modification permet aux cellules imWilms1 de proliférer indéfiniment tout en conservant leur stabilité chromosomique, offrant ainsi un modèle fiable pour des études à long terme. Les cellules imWilms1 immortalisées continuent de présenter la même mutation du gène WT1 et conservent les caractéristiques mésenchymateuses de la lignée Wilms1 d’origine.

Outre ses caractéristiques génétiques et phénotypiques, la lignée cellulaire imWilms1 a fait l’objet d’analyses approfondies concernant l’activité de ses voies de signalisation. Des études protéomiques ont révélé la phosphorylation et l’activation de plusieurs récepteurs tyrosine-kinases (RTK), notamment l’EGFR, le PDGFRβ et l’AXL, entraînant l’activation en aval des voies de signalisation MAPK. L’activation constante de ces voies dans les cellules imWilms1 souligne leur pertinence pour l’exploration de stratégies thérapeutiques ciblées dans le traitement de la tumeur de Wilms. Dans l’ensemble, la lignée imWilms1 constitue un modèle robuste et à long terme pour l’étude des mécanismes moléculaires sous-jacents au développement et à la progression de la tumeur de Wilms, en particulier ceux induits par les mutations du gène WT1 et les voies de signalisation aberrantes.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.