imWilms1

Wilms1 rakuliin on algselt saadud Wilmsi primaarsest kasvajast, mis saadi patsiendilt, kellel diagnoositi suured kahepoolsed neerukasvajad, mis on Wilmsi kasvaja (nefroblastoomi) iseloomulik esinemisviis. Selles rakuliinis on homosügootne mõttetu mutatsioon WT1 geenis (c.149 C>A, p.S50X), mis põhjustab kärbitud, mittefunktsionaalse WT1 valgu teket. WT1 on neerude arengus kriitilise tähtsusega geen ja selle mutatsioon on tihedalt seotud Wilmsi kasvaja patogeneesiga, eriti stromaalse diferentseerumisega kasvajate puhul. Wilms1 rakkudel on stabiilne karüotüüp ilma oluliste kromosoomianomaaliateta ning neid iseloomustab mesenhüümne fenotüüp, mis ekspresseerib vimentiini, kuid millel puuduvad epiteeli markerid, nagu tsütokeratiin. Liinil on piiratud, kuid märkimisväärne võime mesenhüümiliseks diferentseerumiseks, sealhulgas võime diferentseeruda teatud tingimustel lihasarnasteks rakkudeks, mis muudab selle oluliseks mudeliks WT1 mutatsioonide molekulaarsete tagajärgede uurimiseks.

Et ületada primaarsete Wilms1-rakkude piiratud eluiga, loodi imWilms1 rakuliin, viies algsetesse kasvajarakkudesse sisse kolmekordse mutandi SV40 suure T antigeeni (U19dl89-97tsA58), mis hõlbustab nende immortaliseerimist. See modifikatsioon võimaldab imWilms1 rakkudel piiramatult paljuneda, säilitades samal ajal kromosomaalse stabiilsuse, pakkudes seega usaldusväärset mudelit pikaajalisteks uuringuteks. Immortaliseeritud imWilms1-rakkudel on jätkuvalt sama WT1-mutatsioon ja nad säilitavad Wilms1 vanemliini mesenhüümilised omadused.

Lisaks geneetilistele ja fenotüüpilistele omadustele on imWilms1 rakuliini ulatuslikult analüüsitud selle signaaliradade aktiivsuse suhtes. Proteoomilised uuringud on näidanud mitmete retseptoritürosiini kinaaside (RTK), sealhulgas EGFR, PDGFRβ ja AXL fosforüleerimist ja aktiveerimist ning MAPK-signaaliradade allavoolu aktiveerimist. Nende radade järjepidev aktiveerimine imWilms1 rakkudes rõhutab nende tähtsust Wilmsi kasvaja sihtotstarbeliste ravistrateegiate uurimisel. Üldiselt on imWilms1 usaldusväärne ja pikaajaline mudel Wilmsi kasvaja arengu ja progresseerumise aluseks olevate molekulaarsete mehhanismide uurimiseks, eriti nende, mis on tingitud WT1 mutatsioonidest ja kõrvalekalduvatest signaaliradadest.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest