imWilms1

Wilms1 hücre hattı orijinal olarak, Wilms tümörünün (nefroblastom) karakteristik bir sunumu olan büyük bilateral böbrek tümörleri tanısı konan bir hastadan elde edilen bir primer Wilms tümöründen türetilmiştir. Bu hücre hattı, WT1 geninde (c.149 C>A, p.S50X) homozigot saçma bir mutasyon barındırır ve kesilmiş, işlevsel olmayan bir WT1 proteininin üretilmesine yol açar. WT1 böbrek gelişiminde kritik bir gendir ve mutasyonu, özellikle stromal farklılaşma gösteren tümörlerde Wilms tümörünün patogenezi ile yakından ilişkilidir. Wilms1 hücreleri önemli kromozomal anormallikler olmaksızın stabil bir karyotip sergiler ve sitokeratin gibi epitelyal belirteçlerden yoksunken vimentin eksprese eden mezenkimal bir fenotip ile karakterize edilirler. Bu hat, belirli koşullar altında kas benzeri hücrelere farklılaşma potansiyeli de dahil olmak üzere mezenkimal farklılaşma için sınırlı ancak önemli bir kapasite gösterir ve bu da onu WT1 mutasyonlarının moleküler sonuçlarını incelemek için çok önemli bir model haline getirir.

Birincil Wilms1 hücrelerinin sınırlı ömrünün üstesinden gelmek için, imWilms1 hücre hattı, orijinal tümör hücrelerine üçlü mutant SV40 büyük T antijeni (U19dl89-97tsA58) eklenerek ölümsüzleştirilmelerini kolaylaştırarak oluşturulmuştur. Bu modifikasyon, imWilms1 hücrelerinin kromozomal stabiliteyi korurken süresiz olarak çoğalmasını sağlar ve böylece uzun vadeli çalışmalar için güvenilir bir model sunar. Ölümsüzleştirilmiş imWilms1 hücreleri aynı WT1 mutasyonunu sergilemeye devam etmekte ve ana Wilms1 hattının mezenkimal özelliklerini korumaktadır.

Genetik ve fenotipik özelliklerine ek olarak, imWilms1 hücre hattı sinyal yolu aktivitesi açısından kapsamlı bir şekilde analiz edilmiştir. Proteomik çalışmalar, EGFR, PDGFRβ ve AXL dahil olmak üzere çeşitli reseptör tirozin kinazların (RTK'lar) fosforilasyonunu ve aktivasyonunu ve MAPK sinyal yollarının aşağı akış aktivasyonunu ortaya çıkarmıştır. Bu yolakların imWilms1 hücrelerindeki tutarlı aktivasyonu, Wilms tümöründe hedefe yönelik terapötik stratejilerin araştırılması için uygunluklarının altını çizmektedir. Genel olarak, imWilms1, Wilms tümör gelişimi ve ilerlemesinin altında yatan moleküler mekanizmaları, özellikle de WT1 mutasyonları ve anormal sinyal yolakları tarafından yönlendirilenleri araştırmak için sağlam ve uzun vadeli bir model görevi görmektedir.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın