imWilms1

Celična linija Wilms1 je bila prvotno pridobljena iz primarnega Wilmsovega tumorja, ki je bil pridobljen od bolnika z diagnozo velikih obojestranskih ledvičnih tumorjev, kar je značilna oblika Wilmsovega tumorja (nefroblastoma). Ta celična linija ima homozigotno nesmiselno mutacijo v genu WT1 (c.149 C>A, p.S50X), ki povzroča nastajanje skrajšanega, nefunkcionalnega proteina WT1. Gen WT1 je ključnega pomena za razvoj ledvic, njegova mutacija pa je tesno povezana s patogenezo Wilmsovega tumorja, zlasti pri tumorjih, ki kažejo stromalno diferenciacijo. Celice Wilms1 imajo stabilen kariotip brez večjih kromosomskih nepravilnosti, zanje je značilen mezenhimski fenotip, saj izražajo vimentin, nimajo pa epitelijskih označevalcev, kot je citokeratin. Linija kaže omejeno, vendar pomembno sposobnost mezenhimske diferenciacije, vključno z možnostjo diferenciacije v mišične celice pod posebnimi pogoji, zaradi česar je ključni model za preučevanje molekularnih posledic mutacij WT1.

Da bi premagali omejeno življenjsko dobo primarnih celic Wilms1, je bila celična linija imWilms1 vzpostavljena z vnosom trojnega mutiranega antigena SV40 velikega T (U19dl89-97tsA58) v prvotne tumorske celice, kar je omogočilo njihovo nesmrtnost. Ta modifikacija omogoča celicam imWilms1 neomejeno razmnoževanje ob ohranjanju kromosomske stabilnosti, s tem pa ponuja zanesljiv model za dolgoročne študije. Imortalizirane celice imWilms1 še naprej kažejo isto mutacijo WT1 in ohranjajo mezenhimske značilnosti starševske linije Wilms1.

Poleg genetskih in fenotipskih značilnosti je bila celična linija imWilms1 obsežno analizirana glede aktivnosti signalnih poti. Proteomske študije so razkrile fosforilacijo in aktivacijo več receptorskih tirozin kinaz (RTK), vključno z EGFR, PDGFRβ in AXL, z nadaljnjo aktivacijo signalnih poti MAPK. Dosledna aktivacija teh poti v celicah imWilms1 poudarja njihov pomen za raziskovanje ciljnih terapevtskih strategij pri tumorju Wilms. Na splošno je imWilms1 zanesljiv in dolgoročen model za raziskovanje molekularnih mehanizmov, ki so podlaga za razvoj in napredovanje tumorja Wilms, zlasti tistih, ki so posledica mutacij WT1 in aberantnih signalnih poti.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo